Cytoskeleton微管蛋白（罗丹明）：猪脑常见问题分析

猪脑微管蛋白（纯度>99%，见分类#T240）已被修改为含有随机表面赖氨酸共价连接的罗丹明。罗丹明的活化酯用于标记蛋白质。标记化学计量法通过蛋白质和染料浓度的光谱测量来确定（蛋白质结合时的染料消光系数为64，000M）^-1厘米^-1).最终标记化学计量是每个微管蛋白异二聚体1-2种染料。罗丹明标记的微管蛋白可以使用530-550 nm激发和580-600发射的滤光片组进行检测。罗丹明微管蛋白具有多功能、稳定且易于运输的形式。它可用于显微注射或体外聚合。Cytoskeleton， Inc. 还提供 AMCA（货号 # TL440M）、海利特福陆 488（货号 # TL488M）、X-罗丹明（货号 # TL620M）和海利特福陆（货号#TL670M）标记的相同质量的微管蛋白。   

作为Cytoskeleton全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cytoskeleton热销产品微管蛋白（罗丹明）：猪脑。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。  

Cytoskeleton公司目前主要的产品有340余种，其产品主要覆盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关领域，提供对应的蛋白质，抗体，检测与分析试剂盒，并且产品线还在不断的扩大中。

微管蛋白（罗丹明）：猪脑用途：

基于激光的应用 监测活细胞中的微管动力学 

斑点显微镜 

荧光微管的形成 

MAP和微管相关运动活动的显微镜检查 

纳米技术

用于标记的微管蛋白的蛋白质纯度：

通过在4-20%聚丙烯酰胺凝胶上扫描考马斯蓝染色蛋白的密度测定来确定。用于TL590M的蛋白质是>99%纯微管蛋白（图1 A）。标记的蛋白质在SDS凝胶上运行并在紫外光下拍照。任何未掺入的罗丹明染料在染料正面都可见。在染料前沿未检测到荧光，表明最终产品中不存在游离染料（图1 B）。

图 1：罗丹明微管蛋白纯度测定。在50-4%SDS-PAGE系统中通过电泳分离20μg未标记的微管蛋白样品，并用考马斯蓝（A）染色。使用精密红蛋白测定试剂（货号#ADV02）进行蛋白质定量。在20-4%SDS-PAGE系统中运行20μg相同的蛋白质样品，并直接在紫外线照射下拍照（B）。

微管蛋白（罗丹明）：猪脑生物活性：

通过微管蛋白聚合测定法进行评估。为了通过质量控制，G-PEM中5 mg / ml罗丹明标记的微管蛋白溶液加5%甘油必须聚合至>85%。这与相同条件下的未标记微管蛋白相当。  

微管蛋白（罗丹明）：猪脑常见问题 

问题1：TRITC罗丹明标记的微管蛋白（货号#TL590M）能否用于监测活细胞中的微管蛋白动力学？

答案 1： 是的，细胞骨架的所有荧光标记微管蛋白，包括TRITC罗丹明 - 微管蛋白，都可以微注射到细胞中，以研究活细胞中的微管蛋白定位和动力学。请参阅产品数据表（类别#TL590M）和这些论文上的简要协议，以获取有关用荧光标记蛋白微注射细胞的指导（Smilenov等人，1999。在静止成纤维细胞中揭示的局灶性粘连运动。科学。286, 1172-1174;洛佩兹-卢赫等人，2001年。蛋白激酶 C-δ C2 样结构域是肌动蛋白的结合位点，可在中性粒细胞中实现肌动蛋白再分布。生化· 357, 39-47;林和丹瑟，2009年。通过荧光散斑显微镜（FSM）对F-肌动蛋白动力学进行活细胞成像。J.30， e1325， DOI： 10.3791/1325）。 

问题2：储存TRITC罗丹明标记的微管蛋白以保持高活性的最佳方法是什么？

答案 2： 冻干微管蛋白产品的推荐储存条件是4°C，在黑暗中使用干燥剂将湿度保持在<10%的湿度。在这些条件下，蛋白质可稳定保存6个月。冻干蛋白也可以在-70°C干燥储存，在那里它可以稳定6个月。但是，在-70°C时，管盖中的橡胶密封件可能会破裂并允许水分进入。因此，我们建议储存在4°C。 如果储存在-70°C，如果利用这种储存条件，则必须在冻干蛋白中加入干燥剂。按指示重构蛋白质后，将G-PEM缓冲液中的浓缩蛋白质等分，在液氮中快速冷冻并储存在-70°C（稳定6个月）。注意：在液氮中快速冷冻微管蛋白非常重要，因为其他冷冻方法会导致活性显着降低。通过在室温水浴中放置1分钟来快速解冻。避免反复冻融循环。   

Cytoskeleton专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰（PTM）、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品，尤其以细胞骨架相关研究见长，既能满足于样品较少的科学研究，也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。此外，公司还提供微管蛋白，肌动蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等现有产品的药物筛选服务。