Biogradetech---“萤火虫”带你走进双荧光素酶报告基因的世界

你想验证miRNA对靶基因的影响吗?——双荧光素酶报告基因测定

你想了解miRNA和lncRNA/circRNA之间的靶向相互作用吗?——双荧光素酶报告基因测定

你想知道下游基因的转录因子是什么吗?——双荧光素酶报告基因测定  

是的，双荧光素酶系统是如此强大! 

双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告基因系统是一种常用的生物学实验技术，用于研究基因表达和调控。双荧光素酶报告基因通常以萤火虫荧光素酶（Luciferase）为报告基因，海肾荧光素酶（Renilla Luciferase）为内参基因。该报告系统具有检测速度快、灵敏度高、动态范围宽、无细胞内有源干扰等优点。广泛应用于基因调控和非编码RNA靶向相互作用的研究领域。今天，我们将重点讨论这个话题。  

荧光素酶（Luciferase）来自于北美萤火虫，它能够催化荧光素底物的氧化反应，产生可见光。这种发光反应非常灵敏和特异，使得荧光素酶成为研究基因表达和调控的理想工具。通过将荧光素酶基因与感兴趣的基因启动子或调控序列连接，可以构建荧光素酶报告基因，用于研究基因的转录活性和调控机制。

另一方面，海肾荧光素酶（Renilla Luciferase）是一种海洋生物海肾中发现的发光酶，其发光机制与萤火虫荧光素酶不同。海肾荧光素酶荧光素酶（Renilla Luciferase）可以被共同底物，底物共轭的荧光素底物所催化，产生另一种发光。通过将海肾荧光素酶（Renilla Luciferase）基因与内部对照序列连接，可以构建报告基因，用于对实验条件的标准化和校正。  

双荧光素酶报告基因系统利用双荧光素酶同时进行检测，可以实现基因表达的定量和标准化。通过测量两种发光信号的强度比例，可以减少实验误差和干扰，提高结果的可靠性和准确性。这种系统广泛应用于基因调控研究、药物筛选、信号通路分析等领域。 

EZMeta? 双荧光素酶报告基因检测试剂盒提供了一种简单、灵敏、快速的 检测方法，产品基本信息如下。  

【产品基本信息】

货号：D-AKC8010 

规格：100T / 1000T 

适用样本：细胞、原生质体、植物叶片 

储存：-20℃保存12个月

【产品基本原理】

在 ATP、镁离子和氧气存在的条件下，萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）可以催化萤火虫荧光素（Luciferin）生成氧化荧光素（Oxyluciferin），在荧光素被氧化的过程中，会产生光信号。在氧气存在的条件下，海肾荧光素酶（Renilla luciferase）可以催化腔肠素（Coelenterazine）氧化成肠酰胺（Coelenteramide），在腔肠素氧化的过程中也会产生光信号。通过荧光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。 

通常把感兴趣基因的转录调控元件或 5'-启动子区克隆在 Luciferase 的上游，或把 3'-UTR 区克隆在 Luciferase 的下游，构建成报告基因（Reporter gene）质粒，然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，通过检测荧光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。海肾荧光素酶更多地被用作检测转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。双荧光素酶报告基因检测试剂盒先以萤火虫荧光素为底物检测萤火虫荧光素酶活性，然后加入抑制萤火虫荧光素酶催化的物质，同时加入腔肠素检测海肾荧光素酶活性，实现双荧光素酶报告基因检测。该试剂盒具有检测迅速、灵敏度高、检测范围广，无细胞内源活性干扰等特点。  

【产品注意事项】

1. 由于温度对酶反应有影响，所以测定时，样品和试剂均需达到室温后再进行检测。

2. 为取得合适的测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，每个样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制一致；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入。

3. 检测时需使用全黑色或白色的 96 孔板，防止相邻孔的干扰。

4. 萤火虫荧光素酶催化的生物发光的zui强波长为 560 nm，海肾荧光素酶催化的生物发光的zui强波长为 480 nm。

5. Renilla Luciferase Substrate 易挥发，注意密封保存。

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总之，双荧光素酶报告基因系统的起源于萤火虫和海肾中的发光酶，并且在基因表达和调控研究中发挥着重要作用。它提供了一种灵敏、可靠和高通量的方法，用于研究基因的转录活性和调控机制。   

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