Worthington 蛋白酶 K, Recombinant解决方案

天然蛋白酶K，产品代码PROK和PROKS已停产，取而代之的是重组蛋白酶K，产品代码PROKR和PROKRS。重组产品符合与天然产品相同的规格。   蛋白酶K是一种丝氨酸蛋白酶，对脂肪族、芳香族和其他疏水性氨基酸具有广泛的特异性。PROK的分子量为27，000道尔顿，并且依赖于Ca2+。它不会被金属离子螯合剂（如EDTA，巯基试剂，PCMB，TLCK或TPCK）灭活。它还在 0.5% SDS 中保留活性。它可以被PMSF或DFP抑制。   

作为Worthington全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Worthington主要产品蛋白酶 K, Recombinant。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。  

稳定性/存储：

冻干粉在2-8°C下可稳定保存一年。 50mM Tris-HCl、pH 8.0 和 1mM CaCl2 中的溶液在 2-8°C 下可稳定保存数月。 储存在2-8°C。  

蛋白酶 K, Recombinant相关产品：

无核酸酶白蛋白 脱氧核糖核酸酶 I （DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF） 组蛋白 （H， NHL） 溶菌酶 （LY/LYSF） 核酸酶，微球菌 （NFCP） 核酸酶，S1 （中新/中核酸） 核酸，DNA，大肠杆菌，λ/片段，RNA磷酸酶，碱性（CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC）磷酸二酯酶 I （VPH） 磷酸二酯酶 II （SPH） 逆转录酶，重组 HIV （RTHIV）核糖核酸酶 A （R/RAF/RASE/RS/RPDF）核糖核酸酶 T1，不含动物源性 （RT1S）  

蛋白酶 K, Recombinant测定：

方法 

蛋白酶K水解用尿素变性的血红蛋白，并释放Folin Postive氨基酸和肽，它们被确定为酪氨酸当量。1 单位在 1°C、pH 37.7 下释放 5 μ 摩尔 Folin 阳性氨基酸，使用变性血红蛋白作为底物。 

试剂

0.05 N HCl - 用试剂级水将 0.82 ml 浓度 HCl 稀释至 200 ml。 

0.5 M NaOH - 将 4.0 gm NaOH 溶解在 200 ml 试剂级水中。 

缓冲底物 - 将2.0 gm血红蛋白溶解在35 ml试剂级水中，加入36.0 gm尿素和16 ml 0.5 M NaOH。在室温下搅拌 30 - 60 分钟。加入0.618克硼酸并搅拌。用 7 N HCl 将 pH 值调节至 5.5，并将 q.s. 调节至 100 ml。 

酪氨酸标准品（2.5 nmol / L） - 将45.3mg酪氨酸溶解在100ml 0.05N HCl中。 

0.3 M 三氯乙酸 - 将 9.8 gm 三氯乙酸溶解在 200 ml 试剂级水中。

Folin试剂 - 将10毫升Folin-Ciocalteus苯酚试剂加入20毫升试剂级水中。 

酶

将10mg冻干材料溶解在1ml试剂级水中。使用前立即用水准备 1：1000 稀释液。 

程序

标记空白、标准和测试的透明玻璃试管。加入 2.5 ml 缓冲液底物，并在 5°C 下孵育 37 分钟。 通过将0.2ml酪氨酸标准品加入标准管中，0.2ml样品加入测试中，0.2ml0.05N HCl加入空白开始反应。在 10°C 下孵育 37 分钟。 通过加入5.0ml三氯乙酸停止反应。混合，然后将0.2ml样品加入空白和标准品中，并向测试中加入0.2ml 0.05N HCl。混合并在室温下静置10分钟，过滤并移液到1.0ml滤液，2.0ml 0.5N NaOH和0.6mlFolin试剂的试管中。混合均匀。静置 15 分钟，阅读 A₅₇₈纳米。

蛋白酶 K, Recombinant部分引用文献：

Bernabeu, C. , Conde, P. , Vasquez, D. and Ballesta, J. Peptidyl Transferase of Bacterial Ribosome: Resistance to Proteinase K , Eur J Biochem 93 , 527 , 1979 Brdicka, D. and Krebs, W. Localization of Enzymes by Means of Proteases , Biochim Biophys Acta 297 , 203 , 1972 Crowe, J. , Cooper, H. , Smith, M. , Sims, M. , Parker, D. and Gewert, D. Improved Cloning Efficiency of Polymerase Chain Reaction (PCR) Products After Proteinase-K Digestion , Nucleic Acids Res 19 , 184 , 1991  

酶是Worthington的主要产品线。从技术上讲，Worthington实际上并不制造酶，而是从各种动植物组织和各种微生物来源（如细菌、真菌和霉菌）中提取酶。根据该酶在材料中的普遍性选择特定酶的起始材料。例如，一种功能涉及使肌肉工作的酶将主要存在于肌肉组织中，因此起始材料可能是兔肌肉或猪心；参与发酵的酶最好在酵母中找到。 

Worthington使用的一些动物组织包括牛胰腺、猪肾、牛眼、马肝、兔肌肉、牛肝、猪心、马血和小牛肠。各种蛋白质也从辣根、红薯、杏仁和美洲商陆中提取。一些产品是从大肠杆菌、几种梭状芽胞杆菌和各种其它细菌中分离出来的。还使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和鸡蛋等。   Worthington是一家通过的ISO9001认证的家族企业。主要生产用于生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。作为生命科学领域知名的酶类供应商，以及细胞分离酶的专家级公司，其核心酶产品包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。