QuickZyme-Hydroxyproline测定：高效生物化学分析解决方案

发布者：艾美捷科技发布时间：2024-07-12

分享到：

胶原蛋白代谢的失调可能导致如纤维化（胶原蛋白过多）或骨关节炎（胶原蛋白过少）等病理状态。因此，在许多与疾病相关的研究中，测量胶原蛋白的生成是重要的。

羟脯氨酸是一种非蛋白质氨基酸，在哺乳动物中主要出现在弹性蛋白和胶原蛋白中。它的存在主要限于胶原蛋白的三螺旋结构中，在那里它增加了三螺旋结构的稳定性。羟脯氨酸是在翻译后由脯氨酸羟化酶的作用从特定的脯氨酸残基形成的。组织水解产物中的羟脯氨酸可以用作胶原蛋白含量的直接测量。

QuickZyme羟脯氨酸检测试剂是对Prockop和Udenfriend描述的方法（《分析生物化学》，1960年，1: 228-239）的改进。该检测测量样本中存在的总羟脯氨酸量。如果这些羟脯氨酸是通过胶原蛋白的水解获得的，它代表了样本中存在的所有类型的胶原蛋白，而不会区分胶原蛋白的类型以及前胶原蛋白、成熟胶原蛋白和胶原蛋白降解产物。

该检测简单，产生的色素在570纳米处有z大的吸收。该检测被开发用于测量酸性组织和/或蛋白质水解产物中的羟脯氨酸，其方式是不需要酸解胶原蛋白后的干燥步骤，而这通常需要特殊设备。

艾美捷QuickZyme Biosciences-Hydroxyproline测定试剂盒组成：

2个粘合板封条

检测缓冲液

2个检测试剂A

检测试剂B

无菌水中的羟脯氨酸标准品（3 mM）

96孔检测板

检测协议手册

注意事项：

试剂盒包含正丙醇、高氯酸和二甲基亚砜。在样本水解和使用试剂盒过程中，请佩戴眼部、手部、面部和衣物防护装备。在通风柜中进行检测。

关键参数：

1、这类检测，像许多生化检测一样，可能会显示出基质效应：样本中的干扰因素影响信号。通过稀释水解产物可以避免这种效应。如果首次使用某种样本类型，应测试不同的稀释度，直到获得A570与稀释度的线性关系。通常至少需要5倍的稀释（在100毫克组织/毫升6M盐酸水解产物中）。应用说明中给出了几种小鼠组织的建议稀释度（请参阅产品网页）。

2、如果为了避免基质效应，特定样本类型所需的稀释度导致A570值非常低，我们建议使用QuickZyme敏感组织羟脯氨酸试剂盒。

3、检测中使用的样本应存在于含有4-6M盐酸（酸水解）或2-4M氢氧化钠（碱水解）的溶液中。

4、在检测的z后一步，60°C下颜色发展的孵化时间为1小时。这是基于在烘箱中的孵化。如果在板式孵化器中进行孵化（孵化器与板之间接触紧密），则缩短孵化时间（20-30分钟）就足够了。

5、当检测缓冲液加入35微升的水解产物时，可能会出现混浊现象，这将在一分钟内消失，不会影响检测。

6、在低温下，检测缓冲液中可能含有一些晶体。这些可以通过加热轻松溶解。

7、在室温以下，试剂A可能会变成凝胶状或固体，加热至37°C并涡旋混合可以解决这个问题。

典型的羟脯氨酸标准曲线（不减去背景）：

所示数据曲线（见下文）仅用于演示。精确的A570值在每次实验中可能略有不同

QuickZyme Biosciences-Hydroxyproline