Cas9 NLS,S.pyogenes在蛋白质的N端和C端含有猿猴病毒40(SV40)T agtigen核对数定位序列(NLS)。
体外Cas9介导的DNA消化:
1.将以下成分添加到无菌、无核酸酶的冰管中:
Components Volume Final Concentration
SgRNA(300 nM) 2μl ~30 nM
Cas9 Nuclease Protein(1000 nM) 0.60μl ~30 nM
10X Cas9 Nuclease Reaction Buffer 2μl 1X
Nuclease-free H2O 12.4μl -
在室温下预培养15分钟
Substrate DNA(30 nM) 3μl 3 nM
Total Volume 20 μl -
2.通过短暂离心收集所有成分。将反应物在37°C下培养1小时。
3.通过琼脂糖凝胶电泳分析片段。
艾美捷Novatein Bioscience-NLS-Cas9-NLS:
货号:PR-137211
规格:50 μg,313 pmol,含反应缓冲液
配方:在大肠杆菌中表达的重组Cas9野生型蛋白,供应的缓冲液为10 mM Tris-HCl(pH 7.4)、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、300 mM NaCl 和 50%(体积/体积)甘油
宿主/来源:大肠杆菌
应用:创建用于重组的双钝端
储存条件:-70℃。避免冻融循环
浓度:1μg/μL,6.26 μM
储存缓冲液:10 mM Tris-HCl(pH 7.4)、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、300 mM NaCl 和 50%(体积/体积)甘油
反应条件:使用1X Cas9反应缓冲液并在37℃下孵育
物理外观:无菌过滤的无色溶液
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