PNA Bio-KO/KI细胞丨细胞系生成（敲除和敲除）方案

PNA Bio及时提供经济的细胞系生成（敲除和敲除）。工程细胞系生成过程如下所示：

设计并合成4到8个gRNA载体

通过错配敏感的核酸酶检测选择最有效的工程核酸酶

合成报告载体，用于富集基因编辑事件的细胞

优化转染协议

设计基因敲入项目的供体载体

通过MACS（磁珠分选）、FACS（流式细胞分选）或海波霉素抗性进行细胞池的选择（选项：在选定的细胞池中验证效率）

单细胞克隆

使用T7E1检测和/或F-PCR对克隆进行筛选

通过TA克隆和测序确认纯合子基因敲除

基因敲除细胞系服务：

提供至少两个独立的基因敲除（KO）克隆，并确认无支原体污染

时间线：4到7个月

基因敲入细胞系服务：

提供至少两个独立的克隆，并确认无支原体污染

包括供体载体设计和合成

时间线：5到7个月

艾美捷PNA Bio 通过FACS确认基因敲除（示例）：

PNA Bio-KO/KI细胞相关文献：

Enhanced tumor-targeting selectivity by modulating bispecific antibody binding affinity and format valence. Mazor Y et al (2017) Sci Rep 7:40098.

Modeling human epilepsy by TALEN targeting of mouse sodium channel Scn8a. Jones JM & Meisler MH (2014) Genesis 52(2):141-148.

Small molecules enhance CRISPR genome editing in pluripotent stem cells. Yu C et al (2015) Cell Rep 16(2):142-147.

Inhibition of non-homologous end joining increases the efficiency of CRISPR/Cas9-mediated precise [TM: inserted] genome editing. Maruyama T et al (2015) Nat Biotech 33(5):538-542.

ssODN-mediated knock-in with CRISPR-Cas for large genomic regions in zygotes. Yoshimi K et al (2016) Nat Comm 7:10431.

Efficient CRISPR-Cas9-mediated generation of knockin human pluripotent stem cells lacking undesired mutations at the targeted locus. Merkle FT et al (2015) Cell Rep. 11(6):875-883.

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