PNA Bio/艾美捷自定义sgRNA/Cas9的合成服务

RNA引导的烯醇化酶（RGENs）是一种新的、可编程的基因组工程工具，适用于CRISPR/Cas系统。Cas9与两种RNA复合时形成序列特异性内切酶，其中一种引导靶选择（crRNA），另一种是恒定成分（tracrRNA）。

RGEN识别一个长度为23bp、以两个鸟嘌呤（GG）结尾的靶特异性序列。这种对靶位点选择的最低要求意味着RGEN可以被设计为切割基因组的任何区域（理论上每8bp）。

RGEN最近被证明支持人类细胞、斑马鱼和细菌的高效基因组工程。此外，RGEN的使用允许基因组工程过程的多路复用（例如，一次敲除细胞中的多个基因）。

RGEN还显示出令人印象深刻的序列特异性活性。RGEN的活性和特异性与TALEN相当。

艾美捷PNA Bio-自定义sgRNA/Cas9：

在存在或不存在Cas9质粒的情况下，用越来越多的表达sgRNA的质粒转染HEK293细胞。通过T7E1测定评估由CRISPR/Cas9复合物引起的In/del。

PNA Bio-CRISPR/Cas9（RGEN）合成服务：

1、IVT sgRNA合成服务（aRGEN）

包括设计、脱靶搜索和合成

提供50 ug sgRNA，冻干形式

注射/转染准备就绪

琼脂糖凝胶中确认的质量/数量

时间线：2周

2、sgRNA载体合成服务（dRGEN）

包括设计、脱靶搜索和合成

提供sgRNA和Cas9的表达质粒

时间线：2周

可在CMV或EF1a启动子下共表达GFP/HygroR和RFP/PuroR盒的Cas9载体供选择

3、sgRNA验证服务

客户提供基因名称、物种和项目目标（KO、KI等）

包括4~8个gRNA载体的设计、脱靶搜索和合成

将CRISPR/Cas9转染细胞并进行错配敏感核酸酶测定以寻找最有效的核酸酶

sgRNA以表达质粒（dRGEN）或RNA形式（aRGEN）提供

还提供了用于KO筛选的PCR引物、PCR条件和错配敏感核酸酶测定

时间线：3-6周

4、Cas9载体

CV01和CV11:Cas9（CMV或EF1a启动子）

CV02和CV12:Cas9-HygR-GFP（CMV或EF1a启动子）

CV03和CV13:Cas9 RFP PuroR（CMV或EF1a启动子）

5、引导核糖核酸（gRNA）设计

一般情况下，对于1bp和2bp的错配，找到没有脱靶的gRNA序列，并且含有45~70%的GC。如果你不能避免偏离靶点，位于PAM附近的错配比gRNA 5'侧的错配更可取。请注意，非规范PAM（-NAG，-NGA）也可以被切割。

我们开发了gRNA工具，可输出脱靶序列、GC含量和其他功能。您还可以使用公开可用的工具来搜索各种选项。

6、eGFP对照sgRNA

经验证可在体外和体内切割eGFP

注射剂，冻干粉

也可与eGFP质粒和Cas9蛋白一起作为体外切割测定的阳性对照试剂

可用尺寸：20 ug或100 ug（20 ug x 5管）

目录编号：AR04

艾美捷科技是PNA Bio的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。