Alpha Diagnostic International小鼠抗PEG IgM，96次检测，定量特异性活性检测方案

Alpha Diagnostic International小鼠抗聚乙二醇IgM ELISA试剂盒是一种适用于检测和定量血清中PEG特异性抗体活性，或等离子体。仅供研究使用（RUO），不用于诊断，治愈或预防疾病。

艾美捷Alpha Diagnostic International 小鼠抗PEG IgM，96次检测，定量（PEG-040）检测原理：

Anti-PEG ELISA试剂盒基于样品中抗体与固定在微孔板上的PEG抗原的结合。结合的抗体通过抗物种抗体-HRP偶联物进行检测。经过洗涤步骤后，加入显色底物（TMB），颜色的显现与样品中存在的抗PEG抗体的数量成正比。随后加入终止溶液以终止反应，并使用ELISA读数仪在450nm处测量吸光度。样品中抗体的存在相对于抗PEG标准品进行判断。

Alpha Diagnostic International 小鼠抗PEG IgM，96次检测，定量检测程序：

所有步骤均在室温下进行。 在每次添加试剂后，轻轻拍打板子以混合孔内液体，然后再开始孵育。

1.第一次孵育 [100 ?l – 60分钟；洗涤4次]

向预定的孔中各添加100 ?l的标定液、样品和对照品。

轻轻拍打板子以混合试剂，孵育60分钟。

洗涤孔4次，并用新纸巾轻轻拍干。可以选择使用自动洗板机。洗涤不当可能导致信号虚高和重复性差。

2.第二次孵育 [100 ?l – 30分钟；洗涤5次]

向每个孔中添加100 ?l稀释后的抗小鼠IgM HRP。

孵育30分钟。

按步骤2的方式洗涤孔5次。

3.底物孵育 [100 ?l – 15分钟]

向每个孔中添加100 ?l TMB底物。孔内液体将开始变为蓝色。

在黑暗中孵育15分钟，例如，将其放在抽屉或衣橱中。

注意：如果您的微孔板读数仪无法读取光密度（OD）高于2.0，请缩短孵育时间，或在405-410 nm波长下读取OD（结果有效）。

4. 停止步骤 [停止：100 ?l]

向每个孔中添加100 ?l停止溶液。

轻轻拍打以混合。酶反应将停止；孔内液体将变为黄色。

5. 吸光度读取

使用任何市售的微孔板读数仪，能够在450 nm波长下读取。使用适合获取OD读数的程序，如果可用，还可以进行数据计算。

在加入停止溶液后的30分钟内，使用单一波长在450 nm下读取整板的吸光度。如果可用，可以设置程序在630 nm下减去OD以归一化孔背景。

结果解释：

示例：小鼠血清/血浆 IgM

对一组未免疫的实验小鼠进行抗PEG IgM（1:100稀释）的检测。阈值指数使用1 U/ml的校准液进行计算。

结果：

抗PEG IgM：在1:100稀释下，所有血清结果均为阴性（低于1.0阈值）。

注意事项：

阳性结果可能是由于之前接触PEG，或可能是先天免疫库的一部分。

当阳性指数超过5.0时，使用稀释曲线计算滴度是一种更准确的定量方法。

可通过改变样本稀释度来调整检测的敏感性：a）增加稀释度（例如，1:200），将边缘阳性结果降低为阴性；b）减少稀释度（例如，1:50），将边缘样本转为阳性。对于后者，阴性值可能会增加，因此应考虑使用已知阴性样本开发阳性指数（见下文），或使用内部对照。

方法：阳性指数

实验样本值可以相对于对照样本或非免疫样本的值进行表达，通过计算阳性指数。以下是一种典型的方法：

计算对照/非免疫样本的净光密度（OD）均值加上2个标准差（SD）= 阳性指数。

将每个样本的净OD值除以阳性指数。值大于1.0表示阳性抗体活性；小于1.0则为抗体阴性。

Alpha Diagnostic International（ADI）致力于开发、制造和供应新型诊断和质量控制试剂及检测试剂盒，用于人类和动物的基础生物学和疾病研究。艾美捷科技是Alpha Diagnostic International 的特约合作代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。