Bst聚合酶--扩增DNA就用Saphir Bst GreenMaster冻干粉

Bst聚合酶，作为一种特殊的DNA聚合酶，因其独特的特性和广泛的应用而备受关注。

基于Bst聚合酶的活性，Saphir-Bst GreenMaster冻干液在恒定温度（60至65°C）下快速、稳健的扩增DNA。该酶显示出高转移置换活性，并产生高达109的扩增因子，这与PCR测定中的约.30个循环相当。Saphir-Bst GreenMaster冻干液允许在10-20分钟内检测目标基因。

艾美捷Bst聚合酶/Saphir Bst GreenMaster冻干粉（PCR-398S）含有Saphir Bst聚合酶、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）、反应缓冲液、绿色DNA嵌入染料、添加剂和稳定剂，以冻干形式提供，用于20微升Z终检测体积的PCR级水。

Bst聚合酶处理方式：

Saphir Bst GreenMaster冻干粉以8管条或96孔板的形式交付，预装有完整的主混合物，以干燥、室温稳定的格式。这种冻干粉结合了高性能与使用的便利性和稳定性。无需进行冷冻、解冻或在冰上移液。剩余的少量移液步骤Z小化了错误或污染的风险。每个小瓶包含进行20微升LAMP（环介导等温扩增）检测所需的所有组分（除了引物和模板）。要执行检测，只需将小瓶用引物混合物填充并加入DNA模板。这种冻干粉还可以与ROX参照染料一起使用，在兼容ROX信号评估的PCR仪器中。在这种情况下，ROX染料（#PCR-351）应以1倍浓度添加到PCR反应中。

检测设计：等温扩增是一种极其敏感的检测方法，应当注意避免实验设置区域和设备与之前反应的DNA发生污染。一个可能出现的问题是，由于携带污染或非特异性退火引物或引物二聚体形成，导致无模板对照中出现扩增。

引物设计：通常，使用4种不同的引物来识别6个不同的DNA区域，允许特定目标基因的扩增。额外一对引物可以进一步加速扩增，将总检测时间缩短至10-20分钟。由于反应序列复杂，手动设计引物可能具有挑战性。为了简化设计过程，建议使用引物设计软件。由于计算机设计的引物在灵敏度和非模板扩增方面可能会有所不同，建议在Z终选择之前评估2-4组真实引物集。

检测设置：使用无菌过滤头进行移液，并在与DNA制备或分析不同的区域进行设置。所有扩增中都应包括无模板对照。首先，准备一个10倍浓度的引物预混合液。其次，设置等温扩增检测：

分配主混合物：将引物/探针混合物彻底振荡（Vortex）以确保均匀性。向每个PCR管或板孔分配20微升(μl)。

? 使用特定的等温扩增检测仪器或实时PCR循环仪来运行检测。

? 将仪器设置为在60至65°C之间的恒定孵化温度（取决于引物退火温度）。

? 以1分钟的间隔测量荧光强度，持续Z多30分钟。

故障排除：

如果在无模板对照中发生扩增，应复查以下要点：

环境的交叉污染：

使用“DNA Away”溶液清洁设备和区域

用新组分替换试剂库存和预混物

在非模板扩增发生之前提前停止反应

来自先前反应产物的携带污染：

扩增后避免打开反如果需要进行反应后处理，请使用单独的准备区域和设备

引物引起的非模板扩增：

逐步将孵化温度提高1-2°C

为靶序列设计一套新的引物