Saphir Bst Turbo GreenMaster冻干粉说明书参考

Saphir-Bst-Turbo-GreenMaster冻干液专为等温扩增DNA而设计。这种混合物是基于下一代基因增强的Bst聚合酶。该混合物是在恒定温度（60至65°C）下超快速和稳健扩增DNA的理想选择。该酶显示出高链置换活性，并产生高达109的扩增因子，这在PCR测定中相当于大约.30个循环。聚合酶比Saphir-Bst聚合酶（#PCR-389/#PCR-388/#PCR-387）快2-3倍，并且允许在5-10分钟内检测靶基因。

艾美捷Saphir Bst Turbo GreenMaster冻干粉（PCR-395S）包含Saphir Bst Turbo 聚合酶、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸）、反应缓冲液、绿色DNA嵌入染料、添加剂和稳定剂。

PCR级水处理：

Saphir Bst Turbo GreenMaster冻干粉是以8管条状或预装有完整母液的96孔板形式交付的，干燥、室温下稳定。这种冻干粉结合了高性能、使用便利性和稳定性。无需冷冻、解冻或在冰上移液。剩余的少量移液步骤最小化了错误或污染的风险。每个小瓶包含了进行20 μl LAMP检测所需的所有组分（除了引物和模板）。要执行检测，只需向小瓶中加入引物混合物并添加DNA模板。这种冻干粉还可以与ROX参考染料一起使用，在与ROX信号评估兼容的PCR仪器中。在这种情况下，应将ROX染料（#PCR-351）以1倍浓度添加到PCR反应中。

检测设计：

等温扩增是一种极其敏感的检测方法，应注意避免设置区域和设备与之前反应的DNA发生污染。一个可能出现的问题是无模板对照中发生扩增，这可能是由于携带污染或非特异性退火引物或引物二聚体形成造成的。

引物设计：

通常，使用4种不同的引物来识别6个不同的DNA区域，允许特异性扩增目标基因。增加一对引物可以进一步加速扩增，将总检测时间缩短至10-20分钟。

手动设计引物可能因反应序列复杂而具有挑战性。为了简化设计过程，建议使用引物设计软件。

由于计算机设计的引物的灵敏度和非模板扩增可能会有所不同，建议在选定最终引物集之前评估2-4组真实引物集。

检测设置：

使用带无菌过滤头的移液管，并在与DNA制备或分析不同的区域进行设置。所有扩增中都应包括无模板对照。首先，准备一个10倍浓度的引物预混液。其次，设置等温扩增检测：

分配母液

彻底涡旋混合引物/探针混合物以确保均匀性。向每个PCR管或板孔分配20 μl。

? 使用特定的等温扩增检测仪器或实时PCR循环仪来运行检测。

? 将仪器设置为在60至65°C之间的恒定孵化温度（取决于引物退火温度）。

? 以1分钟的间隔测量荧光强度，持续Z多30分钟。

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