SYBR Green检测冻干制剂：具有高度的特异性和灵敏度

SYBR Green检测冻干制剂是为使用荧光DNA染料SYBR Green进行DNA样本的定量实时分析而设计的。在PCR过程中，主混合物中的荧光染料插入到扩增产物中，使得在不需要合成特异性标记探针的情况下，能够快速分析目标DNA。它提供了一个易于操作且功能强大的工具，可以在高达6个数量级的宽动态范围内，以卓越的灵敏度和精确度对样本DNA进行定量。

艾美捷SYBR Green检测冻干制剂/qPCR SybrMaster冻干品（PCR-173S）包含了进行qPCR所需的所有试剂（除了模板、引物和标记荧光探针），全部封装在单个珠子中。基于优化的热启动聚合酶，该混合物具有高度的特异性和灵敏度。其活性在常温下被阻断，并在初始变性开始时自动激活。热激活防止了在PCR设置期间低温下非特异性结合引物和引物二聚体的形成。

推荐的PCR检测：

1）每种引物的Z佳浓度可以在100至500nM之间变化。

引物混合液的准备：

为12个样本或4个样本的三重组合准备13体积的引物混合液，如说明书所述。使用无菌过滤头的移液管取液，并尽量减少标记的DNA探针暴露于光线下。应在与DNA制备或分析不同的区域进行设置。在所有应用中都应包括无模板对照（NTC）。

分配主混合物：

彻底振荡引物/探针混合液以确保均匀性。向每个PCR管或板孔分配15微升。

加入模板DNA：

向每个反应容器中加入5微升的模板DNA（或无模板对照），并盖紧或密封管子/板。每个反应的最终浓度不要超过200纳克DNA。在循环前应对管子或板进行离心，以去除可能的气泡。

建议的循环条件：

2) 退火温度取决于所使用的引物的熔解温度。

3) 延伸时间取决于扩增子的长度。建议对最多500碱基对(bp)的片段使用30秒的时间。为了获得Z佳的特异性和扩增效果，对于每种新的模板DNA和引物对组合，可能需要特别对推荐的参数进行个别优化，尤其是退火温度。