ProbesMaster冻干制剂/qPCR探针主冻干物--易于操作且功能强大

qPCR ProbesMaster冻干液用于使用基于DNA探针的检测对DNA样本进行实时定量分析。建议将冻干物与双重标记荧光探针一起使用，例如TaqMan, 分子信标或FRET探针。它提供了一种易于操作且功能强大的工具，可在高达6个数量级的宽动态范围内以极高的灵敏度和精度对样本DNA进行定量。冻干物在单个珠粒中包含qPCR所需的所有试剂（模板、引物和标记的荧光探针除外）。基于优化的热启动聚合酶的混合物的高特异性和敏感性。其活性在环境温度下被阻断，并在初始变性开始时自动开启。在PCR设置过程中，热激活可防止非特异性氰基化引物的延伸和引物二聚体在低温下形成。

艾美捷ProbesMaster冻干制剂/qPCR探针主冻干物（PCR-156S）：

qPCR探针主冻干粉：包含抗体阻断的热启动聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP、KCl、(NH4)2SO4、MgCl2、添加剂和稳定剂以及PCR级水。

处理：qPCR主冻干粉以PCR反应管条或96孔板的形式交付，预装有完整的qPCR主混合物，以干燥、室温下稳定的格式。这种冻干粉结合了高性能与使用的便利性和稳定性。无需进行冷冻、解冻或在冰上移液。剩余的少量移液步骤Z小化了错误或污染的风险。每个小瓶包含进行20 ?l实时PCR检测所需的所有组分（除了引物、双标记探针和模板）。要执行PCR，只需将小瓶用引物/探针预混液填充并加入DNA模板。这种冻干粉还可以与ROX参照染料一起使用，在兼容ROX信号评估的PCR仪器中。在这种情况下，ROX染料（#PCR-351）应以1倍浓度添加到PCR反应中。

双标记DNA探针：基于双标记DNA探针的实时PCR技术提供了一个高灵敏度和高特异性的PCR系统，具有多重能力。它需要两个标准的PCR引物和能够与扩增子内部部分杂交的DNA探针。双标记DNA探针的序列应避免二级结构和引物-二聚体形成。

引物/探针混合物的制备：在定量PCR反应中推荐制备引物/探针预混液，以减少移液误差。使用无菌过滤头进行移液，并尽量减少标记的DNA探针暴露在光线下的时间。应在与DNA制备或分析不同的区域进行设置。在所有扩增中应包括无模板对照（NTC）。

推荐的PCR检测冻干制剂：

1) 每个引物的Z佳浓度可能从100到500纳摩尔(nM)不等。

2) 要获得Z佳结果，可能需要对DNA探针的浓度进行滴定，范围在50到800纳摩尔(nM)之间。

3) 退火温度取决于所使用的引物和DNA探针的熔解温度。

4) 延伸时间取决于扩增子的长度。建议对于Z长500碱基对(bp)的片段，使用1分钟的时间。

分配主混合物：将引物/探针混合物彻底振荡（Vortex）以确保均匀性。向每个PCR管或板孔分配15微升(?l)。

添加模板DNA：向每个反应容器中加入5微升(?l)的模板DNA（或无模板对照），并盖紧或封住管子/板。每个反应的最终浓度不要超过10纳克(ng) DNA。在循环前应对管子或板进行离心，以去除可能的气泡。