TET Activity试剂盒，使检测简单、准确、可靠和一致

TET家族的5mC羟化酶包括TET1、TET2和TET3。这些TET蛋白可能通过结合富含CpG的区域来防止不必要的DNA甲基转移酶活性，并通过羟化酶活性将5mC转化为5hmC，进而转化为5-羧基胞嘧啶（5-caC）来促进DNA去甲基化。研究表明，基因组5hmC水平与TET羟化酶活性相关。此外，TET1在转录激活和抑制中显示出双重功能，通过结合ES细胞中的不同目标基因。TET1也是急性髓系白血病中MLL基因的融合伴侣，被认为是一种致癌蛋白。TET2被发现在白血病中经常发生突变，被认为是一种肿瘤抑制因子。TET3已被证明在哺乳动物合子的DNA甲基化重编程过程中发挥独特作用。因此，激活肿瘤抑制因子TET酶如TET2或抑制致癌蛋白TET酶如TET1，在癌症诊断和开发新的基于靶点的癌症治疗中将非常重要。然而，目前检测TET羟化酶活性/抑制的方法很少，既适用于核提取物，也适用于纯化的酶。

为了解决这个问题，EpigenTek开发并提供了Epigenase? 5mC羟化酶TET活性/抑制检测试剂盒（比色法）。

TET Activity试剂盒（比色法）（不包含）绑定底物，并转换甲基化底物为羟甲基化产物.其产物可以被特异抗体所识别.比率或者大量的羟基化产物与酶活性成比例，然后通过酶标仪，450nm处比色法检测结果.TET酶活性与光密度值成比例.

该TET Activity试剂盒（#P-3086）具有以下优点和特点：

1、比色法检测，步骤简单明了，方便快速。整个程序可在5小时内完成。

2、直接通过检测TET转化的羟甲基化产物来测量TET羟化酶活性。

3、创新的试剂盒组成使背景信号极低，使检测简单、准确、可靠和一致。

4、既可以使用细胞/组织提取物，也可以使用纯化的TET蛋白，这允许检测体内外TET羟化酶抑制剂的抑制效果。

5、新颖的检测原理实现了高灵敏度。即使是低至20纳克的纯化TET1羟化酶的活性也能被检测到。

6、包含羟甲基化标准品，允许量化TET羟化酶的特异性活性。

7、条状微孔板格式使检测灵活：可进行手动或高通量分析（96次检测）。

艾美捷TET Activity试剂盒原则与程序：

在该测定中，甲基化底物被稳定地涂覆在微孔板孔上。活性TET与底物结合，将甲基化底物转化为羟甲基化产物。TET转化的羟甲基化产物可以用特异性抗体识别。羟甲基化产物的比例或量与酶活性成正比，然后可以通过读取微孔板分光光度计在450nm波长下的吸光度进行比色测量。TET酶的活性又与测量的光密度强度成正比。

TET Activity试剂盒用户指南：

用途： Epigenase? 5mC羟化酶TET活性/抑制检测试剂盒适用于使用核提取物或纯化的TET同工酶（TET 1-3）从包括哺乳动物、植物、真菌和细菌在内的广泛物种中测量总5mC羟化酶TET酶的活性/抑制，并且可以应用于包括但不限于培养细胞、新鲜和冷冻组织等多种形式。

起始材料： 输入材料可以是核提取物或纯化的TET酶。每个检测所需的核提取物量可以是2微克到20微克，最佳范围为5-10微克。纯化酶的用量可以是20纳克到1微克，具体取决于酶的纯度和催化活性。

内部控制： 本试剂盒提供了TET检测标准品（5-羟甲基胞嘧啶），用于量化TET酶活性。由于TET活性可能因组织而异，以及正常和疾病状态之间可能存在差异，建议运行重复样本以确保产生的信号是经过验证的。

注意事项： 为了避免交叉污染，请小心地将样本或溶液滴入条状微孔板孔中。使用防气溶胶的移液管头，并在液体转移之间始终更换移液管头。在整个过程中佩戴手套。如果手套与样本接触，请立即更换手套。