RNA-蛋白质相互作用在细胞中具有重要作用,包括结构、催化和调节功能。RNA免疫沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)是一种强大的方法,用于研究体内单个蛋白质和RNA分子之间的相互作用。RIP的基本原理与染色质免疫沉淀(ChIP)非常相似,这种方法基于使用针对感兴趣蛋白质的特异性抗体来拉下RNA结合蛋白(RBP)和目标RNA复合物。富集蛋白复合RNA后进行qPCR或下一代测序,为研究表观转录组范围内的蛋白-RNA相互作用提供了一种有利的工具。
传统的RNA免疫沉淀(RIP)高分辨低,且需要交联,并且存在重复性差和过程复杂的问题,特别是,耗时较长,且成本较高。为了解决这些问题,EpigenTek开发了一种新的检测方法,即EpiNext CUT&LUNCH RNA免疫沉淀(RIP)试剂盒,用于研究体内蛋白-RNA相互作用,它整合了目前使用的RIP和CUT&RUN的所有优势。
艾美捷EpiNext CUT&LUNCH RNA Immunoprecipitation (RIP) Kit RNA-蛋白免疫共沉淀试剂盒(#P-2037)检测原理:
试剂盒提供了所有必要的试剂,以富集特定RNA结合蛋白的RNA复合物,从而能够通过qRT-PCR或NGS分析各种细胞样本中的蛋白-RNA相互作用。在这个检测中,细胞被渗透处理,并用针对感兴趣蛋白的RIP级抗体处理。然后,一种独特的核酸切割酶混合物选择性地切割目标蛋白区域周围的RNA序列,移除非特异性的RNA-蛋白复合物。只有抗体结合的复合物被选择性保留。捕获的蛋白/RNA复合物中的RNA片段被纯化,可以直接用于qRT-PCR或cDNA库构建,以分析蛋白质与RNA之间的相互作用。
结果示例:
使用EpiNext CUT&LUNCH RNA免疫沉淀(RIP)试剂盒进行目标蛋白/RNA富集:从200,000个MCF-7细胞中,使用阳性对照抗体捕获了SNRNP70/RNA复合物。非免疫IgG用作阴性对照。富集的RNA被纯化,并通过Qubit进行荧光定量。
EpiNext CUT&LUNCH RIP Kit RNA保存建议:
分两部分运输:第1部分在室温下运输,第2部分在 4°C的冰冻冰袋。
收到后,根据上表中的温度避光储存组件。
注:检查WB(清洗缓冲液)和PB(透化缓冲液)之前是否含有盐沉淀 使用. 如果是这样,在室温或37°C下短暂加热并振摇,直至盐重新溶解。
CUT&LUNCH RIP 试剂盒的所有组分在适当储存条件下,自装运之日起可稳定储存6个月。
微信扫码在线客服