CUT&LUNCH: 进阶版ChIP，免超声，高效富集蛋白/DNA复合物

【前情回顾】无需超声，Epigentek酶解法ChIP检测试剂盒（CUT&LUNCH）上新啦！

为什么还要花费数天来完成传统的CUT&RUN或ChIP分析？有了EpigenTek全新的CUT&LUNCH试剂盒，您只需一个上午2小时的时间，就能高效富集目标蛋白/DNA复合物，而无需在流程操作上费周章。 快速操作流程：在不到2小时内完成实验。 低非特异性背景：非特异性DNA结合仅为3-5%。 高特异性与高分辨率：在靶蛋白富集区域的两端选择性切割DNA。 成本效益高：与传统CUT&RUN相比，每次反应成本仅约为一半。 无缝整合现有流程：富集的DNA可直接用于NGS分析，可与现有且成熟的ChIP-seq生物信息学软件和工具无缝对接。 不再让冗长的实验步骤耽误您的工作进度。选择CUT&LUNCH，在满足时间和预算需求的前提下，获得高效且高质量的实验结果。让您的蛋白/DNA复合物富集更轻松省时，午餐前两小时就能搞定！

准备好加速您的染色质研究了吗？ EpiNext CUT&LUNCH（Cleavage Under Target and Liberate Unique Nucleic Complex Homogenously）是一种新创的靶蛋白-DNA复合体定向切割与特异捕获技术，快速靶蛋白/DNA复合体富集 。基于该技术制备的试剂盒综合了ChIP和CUT&RUN的所有优势并克服其缺陷，可在最短时间内实现靶向蛋白/DNA复合物的富集。上午10点开始试验，12点完成，在午餐前就轻松搞定。

超快速三步法 超快速三步法示意图：

1. 蛋白-DNA复合体与抗体结合；

2. 靶向复合体定向酶切割；

3. 选择性捕获抗体结合的靶蛋白-DNA复合体 (add the images)

EpiNext CUT&LUNCH（Cleavage Under Target and Liberate Unique Nucleic Complex Homogeneously）分析试剂盒（货号P-2035）为研究体内DNA-蛋白相互作用提供了一种快速高效的方法。它整合了ChIP和CUT&RUN的所有优点，同时有效克服其局限性。

CUT&LUNCH分析具有如下优势与特点：

1 超快速三步法： 直接从完整细胞开始原位操作，无需ConA固定。整个流程仅需1小时50分钟，有效减少细胞核损伤与染色质丢失，同时保持天然染色质结构。

2 增强特异性与降低背景： 独特的核酸切割酶可在不影响蛋白结合DNA的前提下，于靶蛋白/DNA复合物两端选择性切割DNA，从而降低低序列偏好性和实现高特异性。非特异性蛋白-DNA复合物被有效清除，为目标蛋白富集区域的高分辨率定位提供保障。

3 低起始材料要求： 无论是游离DNA的高效切割还是免疫捕获步骤，都能在最短时间内完成。该方法既适用于细胞也适用于组织，并最大限度地保护目标蛋白不被降解，同时将样本损失降至最低。因此，起始细胞数可低至500个。

4 广泛适用性： 适用于多种培养细胞和新鲜或冷冻组织，并适用于多种物种。无论是组蛋白还是转录因子，都能在保持高特异性与灵敏度的前提下进行分析。

5 高度便捷： 试剂盒包含完成实验所需的全部组分，使EpiNext? CUT&LUNCH分析既方便又具成本效益。

6 无缝整合进现有分析流程： 富集的DNA可直接用于NGS测序，并可用现有、成熟的ChIP-seq生物信息学软件和工具进行分析。

左图：使用EpiNext CUT&LUNCH试剂盒进行目标蛋白/DNA富集：通过阳性对照抗体（H3K4me3）从20万个MCF-7细胞中捕获组蛋白/DNA复合物。非免疫IgG作为阴性对照。富集的DNA被纯化并通过Qubit荧光定量或通过针对GAPDH启动子的qPCR分析进行富集倍数比较。右图：显著降低非特异性背景：CUT&LUNCH为5%，而CUT&RUN为30%，ChiP为20%。

CUT&LUNCH试剂盒（货号P-2035）包含完成从各种细胞样本中富集特定蛋白（组蛋白或高亲和力结合的转录因子）相关DNA复合物所需的全部试剂，通过qPCR或NGS对蛋白与DNA的相互作用进行分析。在本实验中，细胞首先被穿透化，并加入针对靶蛋白的高质量ChIP级抗体。然后利用独特的核酸切割酶混合物，对目标染色质区域两端的DNA进行特异性切割和去除。游离的非特异性蛋白-DNA复合物被清除，而结合有抗体的复合物将被选择性保留。最后，对捕获的蛋白/DNA复合物中的DNA片段进行纯化，可直接用于特定基因位点的qPCR分析或DNA文库构建，从而对蛋白与DNA的相互作用进行全基因组水平的精确解析。 起始材料 起始材料可为各种哺乳动物细胞，包括培养瓶或培养皿中的培养细胞、原代细胞、从血液或体液中分离的稀有细胞群、新鲜/冷冻组织中的细胞、以及从整体细胞群或胚胎细胞中分选得到的特定细胞类型等。每次反应的细胞数可在2 x 10^3至5 x 10^5之间。为获得最佳效果，推荐使用2 x 10^5个细胞作为起始量，但对修饰组蛋白的检测最低可至500个细胞。

CUT&LUNCH对比传统CUT&RUN和ChIP的优势

EpigenTek开发的改良型CUT&RUN技术——CUT&RUN-Fast，采用了一种新型独特的核酸切割酶混合物。该酶对序列偏好性极低，可同时对靶蛋白/DNA复合物两端的染色质进行切割和去除，并在不影响目标蛋白占位DNA的情况下，提升特异性和分辨率。这一改进大大加快了实验进程，无需过夜孵育。EpigenTek在CUT&RUN-Fast基础上进一步升级推出的CUT&LUNCH试剂盒，在极短的操作流程中实现了更高的特异性和更低的背景信号，让您可以在保持高特异性和高分辨率的前提下，大幅缩短实验时间并降低成本。