Worthington 核酸酶，S1,Nuclease测定方法

从某些神经孢子虫和曲霉菌中分离的核酸酶S1特异性水解单链DNA和RNA的末端和内部磷酸二酯键。核酸酶S1的分子量约为34 kDa，以单体形式存在。最佳pH值范围为4.0-4.6，由Zn2+和/或Ca2+激活。抑制剂是EDTA，柠檬酸盐和高浓度SDS。   

作为Worthington全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Worthington主要产品核酸酶，S1,Nuclease。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。  

稳定性/存储：为了在溶液中长期储存长达六个月，将NUCSI稀释至≥6000 u / ml在水中并等分冷冻。稀释溶液可以通过添加0.1%白蛋白（Worthington代码：BSANF）和10%甘油来稳定。   

测定方案： 

方法 

一个单位是在1?C和pH 0.033下每分钟从热变性DNA中释放260μg（37.4 A6）酸溶性核苷酸的酶量 

试剂

缓冲液：0.2M 氯化钠，0.002M 氯化锌₂， 0.06M 通道₃COONa，pH 4.6：溶解 5.844 克氯化钠 （MW 58.44），136 毫克氯化锌₂（MW 136.29）和1.85ml浓冰醋酸在450ml试剂级水中。用4M NaOH将pH值调节至6.10。用试剂级水制成最终体积为500ml。 

酶稀释剂：将40mg BSA溶解在200ml缓冲液中 

底物：切成小纤维，60mg小牛胸腺DNA，在室温下静置至少50小时，溶于18ml试剂级水中。可能需要额外的搅拌才能达到溶解效果。将10ml DNA溶液移至10ml缓冲液中。这是天然小牛胸腺DNA溶液（底物B） 在加热器/搅拌器上的沸水中用搅拌棒在大型 Pyrex 试管中加热剩余的 DNA 溶液，同时搅拌 20 分钟。立即倒入冰块预冷冻的 1 升烧杯中。混合等体积的DNA溶液和冷缓冲液。这是热变性的小牛胸腺DNA溶液（底物A）。尽快使用，防止毛坯抬高。 

15%高氯酸：将21.5ml浓高氯酸（70%）加入78.5ml去离子水中。 

程序

要清洁玻璃管（每个点两个），添加2ml基材B进行测试。包括 2 个装有 2ml 底物 B 的试管（用于空白）（未添加酶）和 2 个装有 2ml 底物 A（天然 DNA 测试）的试管。 

在加入酶之前孵育 5 分钟。 加入0.1ml酶稀释液 在 37°C 下孵育 10 分钟。 

加入2ml 15%高氯酸停止反应。 在冰上停留 10 分钟。 

在台式离心机上以 15 rpm 的速度离心 2000 分钟。

提取3ml上清液并读取A260。

核酸酶，S1,Nuclease相关产品：

无核酸酶白蛋白 脱氧核糖核酸酶 I （DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF） 组蛋白 （H， NHL） 溶菌酶 （LY/LYSF） 核酸，微球菌 （NFCP） 核酸、DNA、大肠杆菌、λ/片段、RNA碱性磷酸酶 （CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC）磷酸二酯酶 I （VPH） 磷酸二酯酶 II （SPH） 蛋白酶 K （PROK/PROKS） 逆转录酶，重组 HIV （RTHIV）  

核酸酶，S1,Nuclease部分引用文献：

Ando, T. 

A Nuclease Specific for Heat-Denatured DNA is Isolated from a Product of Aspergillus oryzae , Biochim Biophys Acta 114 , 158 , 1966 

Britten, R. , Graham, D. and Neufeld, B. 

, Methods in Enzymology Vol. 29 , L. Grossman and K. Moldave , Academic Press, NY , 363 , 1974 

Brookes, A. and Solomon, E. 

Evaluation of the Use of S1 Nuclease to Detect Small Length Variations in Genomic DNA , Eur J Biochem 183 , 291 , 1989  

酶是Worthington的主要产品线。从技术上讲，Worthington实际上并不制造酶，而是从各种动植物组织和各种微生物来源（如细菌、真菌和霉菌）中提取酶。根据该酶在材料中的普遍性选择特定酶的起始材料。例如，一种功能涉及使肌肉工作的酶将主要存在于肌肉组织中，因此起始材料可能是兔肌肉或猪心；参与发酵的酶最好在酵母中找到。 Worthington使用的一些动物组织包括牛胰腺、猪肾、牛眼、马肝、兔肌肉、牛肝、猪心、马血和小牛肠。各种蛋白质也从辣根、红薯、杏仁和美洲商陆中提取。一些产品是从大肠杆菌、几种梭状芽胞杆菌和各种其它细菌中分离出来的。还使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和鸡蛋等。   

Worthington是一家通过的ISO9001认证的家族企业。主要生产用于生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。作为生命科学领域知名的酶类供应商，以及细胞分离酶的专家级公司，其核心酶产品包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。