液体活检(Liquid biopsy)是传统组织活检的非侵入性的替代方法,样本类型包括血液、血浆/血清、脑脊液、尿液、唾液等。液体活检样本含有非常低浓度的无细胞核酸以及细胞外囊泡/外泌体。
液体活检有助于癌症研究:无细胞核酸“生物标志物(biomarkers)”可用于检测和监测肿瘤发展;
(1)细胞凋亡或坏死引起的细胞死亡会导致细胞内容物泄漏到循环系统(cfDNA/cfRNA 来源);
(2)允许检测健康细胞 VS 疾病状态细胞。
尿液作为液体活检的样本类型:
(1)血液中存在的所有物质都会通过肾脏的过滤,并可以在尿液中排出=实时健康状况;
(2)含有多种成分,如循环肿瘤细胞、RNA、ctDNA、EVs、脱落细胞、蛋白质、代谢物;用于疾病检测和诊断的重要生物标志物。
尿液成分:
①细胞DNA和cfDNA——可用于胎儿DNA筛查;
②循环肿瘤DNA——用于疾病监测和治疗结果;
③细胞RNA和cfRNA(miRNA)——生物标志物发现;
④蛋白质——监测疾病状态;
⑤外泌体RNA——生物标志物发现。
与血液相比的特点:
①非传染性;
②类似于血浆/血清的核酸谱;
③易于处理;
④蛋白质浓度低;
⑤非侵入性;
⑥没有用于分析前处理的标准化protocol。
Norgen Biotek为尿液DNA和RNA研究提供完整的工作流程解决方案:
样品保存:
(1)样本通常在二级设施中收集,温度为-70℃;
(2)由于在收集阶段时核酸的快速降解和微生物的生长,尿液必须在运输前立即处理或冷冻;(尿液中的cfDNA主要通过核酸酶活性降解;尿液中的细菌生长);
(3)尿液样本变化很大,并受健康状况和收集时间等因素的影响。
冷冻尿液的坏处:
(1)丰富的蛋白质的沉淀 = 核酸的显著损失;
(2)细胞破裂 = 基因组核酸污染;
(3)冷链运输 = 昂贵,困难
(4)Norgen的收集和保存尿液的产品可以保存:①DNA、cfDNA;②脱落的细胞;③RNA、cfRNA;④细菌细胞;⑤外泌体;⑥病毒;⑦同时灭活细菌、真菌和病毒。
(5)相比于其他竞争对手:Norgen保存分析物的时间室温下2 年以上。
Norgen的尿液样本分离提取试剂盒:Norgen根据样本类型提供专门的RNA和DNA试剂盒;
使用Norgen尿液提取试剂盒的优势:
(1)无苯酚氯仿;
(2)无载体RNA;
(3)为任何下游应用提供无抑制剂样品;
(4)无分子量区别或GC序列偏好;
(5)捕获用于生物标志物研究中的小RNA。
浆液形式(Slurry)VS 柱提法(Spin Column):
Norgen基于专利的碳化硅树脂技术,提供2种形式:浆液形式(Slurry)与柱提法(Spin Column)
(1)浆液形式(Slurry)通常用于大体积的血浆、血清和尿液;样品与悬浮在缓冲液中的树脂混合;
(2)对于新客户,我们通常推荐柱提法(Spin Column);样品通过预先装有树脂的色谱柱。
尿液RNA纯化:
(1)从各种尿样体积中分离RNA;
(2)简单、快速的protocol;
(3)可用于选择性分离外泌体RNA、cfRNA、基因组/细菌RNA或总RNA的试剂盒;
(4)无苯酚-氯仿;
(5)无载体RNA;
(6)无抑制剂RNA;
尿液DNA纯化:
(1)从各种尿样体积中分离DNA;
(2)简单、快速的protocol;
(3)可用于选择性分离cfDNA、基因组/细菌DNA或总DNA的试剂盒;
(4)无苯酚-氯仿;
(5)有效去除PCR抑制剂。
尿液外泌体纯化:
完整尿外泌体的纯化和富集;
多样化的尿样输入量;
无需耗时的超速离心;
无沉淀试剂或过夜孵育;
(5)与多物种的尿液兼容;
(6)不含RNA结合蛋白;
(7)适用于多种下游应用。
Norgen的尿液外泌体纯化与超速离心法(外泌体纯化金标准):
与超速离心相比,Norgen 的外泌体纯化技术产生更高纯度和尺寸特异性的外泌体。
核酸定量:
(1)常规核酸质量检测方法不够灵敏;
(2)尿液和其他类型的液体活检样本中的cf-DNA和cf-RNA含量非常低;
(3)尿液中cf-DNA或cf-RNA的典型产量为 1-100 pg/μL (~0.001 - 0.1ng/uL);
(4)因此,无法使用典型的DNA/RNA定量方法(特别是 Nanodrop)进行定量;
(5)低丰度RNA的定量:请参阅Application Note 47 - Revised Guidelines for RNA Quality Assessment for Diverse Biological Sample Input.
艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商,为您推荐独家代理Norgen Biotek品牌的各种尿液样本提取纯化试剂盒。产品仅限用于科研学术研究用途,不得用于医疗与诊断。
产品名称及描述 | 货号 | 上样量 | 产品说明 |
尿液收集与保存管 | 18118 | 1-120ml | 详情 |
尿液外泌体提取纯化试剂盒 | 57700 | 250?L-30mL | 详情 |
外泌体RNA提取试剂盒 | 58000 | 纯化的外泌体体积 | 详情 |
尿液外泌体纯化和RNA提取试剂盒 | 58300 | 250?L-30mL | 详情 |
尿液microRNA提取纯化试剂盒 | 29000 | 0.5mL-1mL | 详情 |
尿液游离DNA(cf-DNA)提取纯化试剂盒 | 56600 | 250μL-30mL | 详情 |
尿液游离RNA(cf-RNA)提取纯化试剂盒 | 56900 | 100-120ml | 详情 |
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