二代测序(Next generation sequencing,NGS)是一个强大的功能平台,它可以同时给数以万计的DNA分子进行测序。由于这种可以多个样本同时测序的能力,在个性化医疗、遗传疾病和临床诊断等方面,二代测序开创了革命性的领域。在NGS过程中,构建DNA文库是整个测序进程中第一个步,也是最为关键的一步,DNA文库的质量直接影响后续的测序工作。
所谓DNA文库,实际上是许多个DNA片段,在两头接上了特定的DNA接头,形成的混合物。常规DNA建库包括四步:
第一步,准备好DNA样品,样品来源可以是基因组DNA,ChIP拉下来的DNA或者用其他手段特异性富集到的DNA;
第二步,末端修补并加 A尾,用基因工程酶将已打断的DNA片段修饰成平末端后,在DNA的3'端加上一个A尾,以方便后续的接头连接;
第三步,分别在DNA片段的两端加上adapter;
第四步,在完成接头连接后的文库接着再进行高保真PCR扩增,并完成磁珠纯化,即制备成为可用于上机测序的文库。
基于以上基本原理,Epigentek可提供各种二代测序盒子:
货号 | 名称 | 特点 |
P-1051 | DNA Library Preparation Kit (Illumina) | 操作简便,少于2.5h;样本:DNA;上样量:5ng to 1ug |
P-1053 | High-Sensitivity DNA Library Preparation Kit (Illumina) | 灵敏度高;样本:DNA;上样量:0.2ng to 100ng |
P-1055 | Post-Bisulfite DNA Library Preparation Kit (Illumina) | 亚硫酸转化DNA文库;样本:DNA;上样量:0.5ng to 1µg |
P-1056A | High-Sensitivity Bisulfite-Seq Kit (Illumina) | 亚硫酸转化DNA文库,高灵敏度;样本:DNA;上样量:0.2ng to 200ng |
P-2030 | ChIP-Seq High-Sensitivity Kit (Illumina) | 染色质免疫共沉淀测序DNA文库;样本:哺乳动物细胞、组织;上样量:细胞-1*105 to 1*106 组织-5mg to 50mg |
*以上二代测序文库均适用于Illumina测序平台。
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