BMA Biomedicals 应用-解析：《促肾上腺皮质激素释放因子-多巴胺在雄性和雌性猕猴中的相互作用：超越经典的VTA》

解析文章：《Corticotropin-releasing factor-dopamine interactions in male and female macaque: Beyond the classic VTA》 

链接：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/syn.22284

这篇文章探讨了促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）与多巴胺（DA）系统在猕猴中的相互作用，特别是关注于CRF在猕猴腹侧被盖区（VTA）外侧部——外侧被盖背侧核（PBP）和内侧被盖腹侧核（A8）区域的作用。

一、背景

多巴胺系统的重要性：

多巴胺是一种重要的神经递质，参与多种基本行为，包括正负强化、决策制定、工作记忆、刺激显著性和目的性运动等。大多数多巴胺神经元位于腹侧中脑的三个解剖区域：腹侧被盖区（VTA，A10）、黑质致密部（SNc，A9）和内侧被盖腹侧核（A8）。

CRF的作用：

CRF是一种典型的“应激”肽，在应激反应中起关键作用，并靶向腹侧中脑多巴胺系统。CRF对多巴胺神经元的放电具有调制作用，但具体机制尚不完全清楚。

研究区域的选择：

PBP和A8区域在灵长类动物中比例较大，与VTA相比，这些区域的多巴胺神经元对潜在显著刺激（无论价值如何）作出反应，即“显著性”编码。

二、方法

实验动物：

实验使用了6只年轻猕猴（3只雄性和3只雌性），所有实验均遵循美国国立卫生研究院的指导原则，旨在最小化动物使用和痛苦。

组织处理和免疫组化：

动物在深度麻醉下通过心脏灌注处死，首先用生理盐水，然后用4%多聚甲醛固定。大脑被取出并在4%多聚甲醛中过夜固定，然后沉浸在递增浓度的蔗糖溶液中。使用针对CRF（T-4037，Peninsula Laboratories）、酪氨酸羟化酶（TH，Millipore）和钙结合蛋白D-28k（CaBP，Sigma）的抗体进行免疫组化和双重免疫过氧化物酶染色。

电子显微镜成像和数据分析：

使用透射电子显微镜捕获图像，并使用Adobe Photoshop和Illustrator进行亮度和对比度调整。分析CRF标记的轴突终末与TH阳性（DA）和TH阴性（非DA）树突的突触接触。

三、实验

CRF免疫反应性：

CRF标记主要在轴突终末中可见，主要与TH阴性树突形成接触。在PBP和A8区域，CRF阳性终末与TH阴性树突形成的对称（假设性抑制性）突触显著多于不对称（假设性兴奋性）突触。

CRF终末与树突的接触：

在PBP和A8区域，CRF阳性终末与TH阴性树突的接触显著多于与TH阳性树突的接触。在两个区域中，CRF阳性终末与TH阴性树突形成的对称突触比例均较高。

性别差异：

在PBP区域，雄性猕猴中CRF阳性突触与TH阴性树突的接触显著多于雌性。

在A8区域，雄性猕猴中CRF阳性突触与TH阳性树突的接触显著多于雌性，而与TH阴性树突的接触在性别间无显著差异。

四、结论

CRF在PBP和A8区域的作用：

CRF主要在假设性抑制性终末中表达，这些终末主要与TH阴性树突（推测为GABA能中间神经元）形成接触。在基线条件下，CRF在PBP和A8区域可能主要通过抑制GABA能中间神经元来解除对多巴胺神经元的抑制，从而间接影响多巴胺的释放。

性别差异：

在PBP区域，雄性猕猴中CRF对GABA能中间神经元的抑制可能更强。在A8区域，雄性猕猴中CRF对多巴胺神经元的直接抑制可能更强。

CRF在应激反应中的作用：

CRF在应激反应中可能通过调制多巴胺系统来影响行为反应，特别是在处理显著刺激时。未来的研究应进一步探讨CRF在不同应激条件下的动态变化及其对多巴胺系统功能的影响。

五、T-4037产品的作用和价值

T-4037是Peninsula Laboratories生产的一种针对CRF的多克隆抗体，用于免疫组化和电子显微镜研究。在本文中，T-4037抗体发挥了关键作用，使研究人员能够准确定位CRF在猕猴腹侧中脑多巴胺系统中的分布，并分析CRF与多巴胺神经元及非多巴胺神经元之间的相互作用。

高特异性：

T-4037抗体对CRF具有高度特异性，能够在轴突终末中准确标记CRF的存在。

这种特异性确保了研究结果的可靠性和准确性。

敏感性：

T-4037抗体在电子显微镜水平下表现出良好的敏感性，能够清晰地显示CRF免疫反应性颗粒在轴突终末中的分布。这使得研究人员能够精确量化CRF与不同类型树突之间的突触接触。

广泛应用：

T-4037抗体不仅适用于猕猴等灵长类动物的研究，还可用于其他哺乳动物模型中的CRF研究。它为探讨CRF在神经系统中的功能和作用机制提供了有力的工具。

推动神经科学研究：

通过使用T-4037抗体进行的本研究揭示了CRF在猕猴腹侧中脑多巴胺系统中的新作用机制。这为理解应激、情绪和认知等神经生物学过程提供了新的视角和思路。

总之，本文通过使用T-4037抗体等研究工具，深入探讨了CRF在猕猴腹侧中脑多巴胺系统中的作用机制及其与性别差异的关联。这些发现不仅增进了我们对CRF和多巴胺系统相互作用的理解，也为未来的神经科学研究提供了新的方向和启示。

BMA Biomedicals品牌Monoclonal Antibody To Mouse MHC Class II

促肾上腺皮质激素释放因子（CRF），纯抗血清多克隆抗体（货号：T-4037）

兔抗促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）（人，小鼠，大鼠）[UniProt: P06850, Q8CIT0, P01143]

促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）是一种由196个氨基酸的前激素衍生而来的41个氨基酸的肽激素。它是下丘脑对应激的反应，刺激促肾上腺皮质激素（ACTH）的合成和分泌。CRF也在外周组织和胎盘中合成，已知可抑制食欲并增加主观焦虑感。该抗体是通过将CRF偶联载体蛋白免疫兔而产生的。

Product number: T-4037

Clone: polyclonal

Host species: Rabbit IgG

Quantity: 50 ul

Format: Neat undiluted antiserum, lyophilized, packaged under nitrogen.

Reconstitute by adding 50?l distilled water. This will give the equivalent

of undiluted antiserum

Stability: Original vial: at least one year at 4? - 8?C from date of delivery. Minimize

repeated thawing and freezing of the antiserum by freezing aliquots at

-20?C or below.

Reacts: Human, Mouse, Rat

Applications:This antibody has been tested and validated in ELISA against CRF and

in immunohistochemistry (IHC). Other applications like FACS or Western

Blot may work as well. Optimal dilutions should be determined by the

end user.

Immunogen: Synthetic peptide H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-PheHis-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Glu-Gln-Leu-Ala-GlnGln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Met-Glu-Ile-Ile-NH2 coupled to carrier

protein