Molday ION罗丹明B荧光标记物--细胞标记和装载特性分析

随着干细胞治疗应用的增长，对其移植后体内检测方法的开发和完善需求也在增加。磁共振成像已成为追踪移植干细胞的主要方式之一。MRI的优势在于它是一种非侵入性方法，不沉积电离能量，适合进行纵向研究。为了使用MRI区分特定细胞，这些细胞必须用磁性对比剂进行标记。目前，最彻底表征的试剂，Feridex，一种FDA批准的用于肝脏成像的超顺磁性氧化铁（SPIO）对比剂，已不再可用。来自Biopal的Molday ION Rhodamine-B TM（MIRB）是一种新型SPIO对比剂，专为细胞标记应用而配制。MIRB的磁性核心和流体动力学尺寸分别大约为8和35纳米，Zeta值为-31毫伏，与Rhodamine-B（Rh-B）（每个颗粒2个荧光体）结合，可以通过MRI和荧光显微镜观察。Rh-B的激发波长为555纳米，发射波长为565-620纳米。在这项研究中，我们定性和定量地表征了MIRB在非人灵长类动物（NHP）间充质干细胞（MSC）上的标记和装载特性，包括在不同标记浓度下的平均内部铁/MSC，以及细胞内MIRB对MSC活性、增殖能力和功能的影响。我们对MIRB标记的MSC的体外MR特性进行了全面评估，描述了弛豫率测量、最佳成像序列的确定以及在临床1.5 T西门子交响曲MRI设备上的理想检测极限。这些研究为新的SPIO对比剂用于细胞标记和体内MRI检测的未来应用奠定了基础，并提供了原理证明。

艾美捷Molday ION罗丹明B荧光标记物（BPL-CL-50Q02-6A-50）部分结果分析：

1 细胞标记和装载特性分析

1.1 细胞内MIRB分布

经过20小时的孵化，观察到内化的MIRB定位在MSC的细胞质中，特别是在核周体的内吞体中。这种定位模式在光学和荧光显微镜下都很明显，并且适用于所有考虑的标记条件。图1显示了通过普鲁士蓝染色增强的光显微镜图像，用于铁（Fe）的可视化，以及MSC细胞质中Rh-B的荧光显微镜图像。

1.2 标记效率

标记效率，通过流式细胞仪检测Rh-B阳性细胞的百分比，对于用5 mg Fe/ml标记的细胞范围从65.9%，对于用MIRB浓度达到或超过20 mg Fe/ml标记的细胞则超过95%。图2显示了在高达100 mg Fe/ml的MIRB浓度下标记的MSC中Rh-B存在的流式细胞术数据。

1.3 MIRB摄取量

平均每MSC中内化的MIRB量，以pg Fe计，如图3所示。平均Fe/MSC的计算是手动在血细胞计数板上进行的细胞计数的直接函数。手动细胞计数引入的误差，估计在10-15%（37），代表了主要误差以及细胞内铁含量估算的准确性限制。来自六项检测的数据表明，随着MIRB标记浓度的增加，出现了饱和现象。在20至30 mg Fe/ml之间的标记浓度达到平台期，结果平均每MSC摄取量约为15-20 pg Fe。

Molday ION罗丹明B荧光标记物部分文献参考：

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