DNA甲基化在基因表达调控、肿瘤发生以及其他遗传和表观遗传疾病中扮演着重要角色。因此,检测病变细胞中某些基因的甲基化情况可以为该疾病的鉴别提供非常有用的信息。近年来,已经开发了许多针对基因/序列特异性检测DNA甲基化的方法,其中甲基化特异性PCR(MS-PCR)是最常用的方法。MS-PCR通过亚硫酸盐转化DNA中的胞嘧啶为尿嘧啶,能够使用特异性的甲基化引物选择性地扩增甲基化序列。
MS-PCR在扩增亚硫酸盐处理后的DNA时面临挑战。由于原始GC丰富度造成的高目标序列冗余,会产生长链的胸腺嘧啶,这对于聚合酶来说通常很难读取。此外,由于需要延长时间来扩增亚硫酸盐处理后的DNA,以及化学转化后引物结合的减少,使得扩增变得困难。
EpigenTek提供了Methylamp? MS-qPCR Fast试剂盒来解决这些问题。该试剂盒允许进行快速、特异性、敏感和可重复的甲基化特异性定量PCR处理。试剂盒中包含的新型热启动DNA聚合酶可以特别减少MS-qPCR所需的总体时间,从大约2.5小时缩短到只需70分钟。该试剂盒还通过显著增加引物-亚硫酸盐DNA模板的退火,同时减少非特异性退火,从而提高MS-qPCR的灵敏度和特异性。这带来了相当大的时间节省和更高效的MS-qPCR。
艾美捷Methylamp? MS-qPCR试剂盒具有以下特点:
极快速的程序: 可以在70分钟内完成。
丰富的产量: 由于高扩增效率。
在MS-PCR中高度准确和特异性: 减少了假阳性结果。
便捷的主混合体系格式: 允许轻松设置反应。
简单、可靠且一致的检测条件。
可与任何基于模块的实时PCR仪器一起使用。
MS-qPCR试剂盒检测原理:
Methylamp?MS qPCR快速试剂盒提供了一种主混合格式,其中包含热启动DNA聚合酶、dNTP、MS-PCR增强剂、优化的缓冲液和插层绿色染料。这种主混合物便于反应设置。独特的热启动DNA聚合酶在环境温度下处于非活性状态,在95?C下孵育几分钟即可重新激活,可以很容易地整合到现有的热循环步骤中。热启动DNA聚合酶与优化的缓冲液相结合,确保了MS qPCR的特异性和敏感性。绿色染料允许在不使用序列特异性探针的情况下进行DNA检测和分析。
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