Calbiotech肺炎支原体IgG ELISA测定程序方案

肺炎支原体是一种病原体，其临床表现范围从无症状到明显的肺炎。症状在暴露后6到32天开始，包括头痛、不适、咳嗽、喉咙痛和发烧。病程可能持续几天到一个月甚至更长时间。通过ELISA检测到M. pneumoniae IgM抗体或特异性IgG抗体的显著增加，是适当临床环境中近期感染的有力证据。通常在临床发病后1周特异性IgM抗体显著增加，第二周特异性IgG水平上升。然而，M. pneumoniae IgM在感染后可以持续存在超过两年，因此，特异性IgM的检测并不准确表示感染时间。初次感染和再感染可以通过初次感染中存在特异性IgA和特异性IgM的升高，以及再感染中存在特异性IgA而无特异性IgM的存在来区分。通常，如果在发病后10-20天收集的血清中缺少特异性IgM，则强烈表明不是由M. pneumoniae引起的原发性肺炎。

Calbiotech-肺炎支原体（肺炎支原体）IgG ELISA测试系统是一种酶联免疫吸附试验（ELISA），用于检测人血清或血浆中肺炎支原体的IgG类抗体。

艾美捷Calbiotech肺炎支原体IgG ELISA（MP020G）检测原理：

将稀释的患者血清加入到涂有纯化抗原的孔中。如果存在IgG特异性抗体，它会与抗原结合。所有未结合的物质都被洗去，然后加入酶结合物与存在的抗体-抗原复合物结合。过量的酶结合物被洗掉，然后加入底物。孵育板以允许酶水解底物。产生的色泽强度与样本中IgG特异性抗体的数量成正比。

测定程序：

将所有样本和试剂盒组分置于室温（20-25°C）并轻轻混合。

1. 将所需数量的包被条放入支架中。

2. 阴性对照、阳性对照和校准品已准备好使用。通过向200微升样品稀释液中加入10微升样本来准备测试样品的1:21稀释。混合均匀。

3. 向相应的孔中分发100微升稀释血清、校准品和对照品。对于试剂空白，在1A孔位分发100微升样品稀释液。轻敲支架以去除液体中的空气泡，并混合均匀。在室温下孵育20分钟。

4. 清除所有孔中的液体。用300微升1X洗涤缓冲液洗孔三次。用吸收纸或纸巾拍干。

5. 向每个孔中分发100微升酶结合物，并在室温下孵育20分钟。

6. 清除所有孔中的酶结合物。用300微升1X洗涤缓冲液洗孔三次。用吸收纸或纸巾拍干。

7. 向每个孔中分发100微升TMB底物，并在室温下孵育10分钟。

8. 加入100微升终止溶液。

9. 在15分钟内使用ELISA读数器读取450纳米处的光密度（O.D.）。建议使用参考滤光片600-650纳米的双波长。

肺炎支原体IgG ELISA文献参考：

1. Quinn TC. Diagnosis of atypical pneumonias: Legionella, Chlamydia, and Mycoplasma infections. Ann Intern Med1996;124:591-4.

2. Cimolai N, Cheong ACH. An assessment of a new diagnostic indirect enzyme immunoassay for the detection ofanti-Mycoplasma pneumoniae IgM. Am J Clin Pathol 1996;105:205-9.

3. 5. Shearman MJ, Cubie HA, Inglis JM. Mycoplasma pneumoniae infection: early diagnosis by detection of specificIgM by immunofluorescence. Br J Biomed Sci 1993;50:305-8.

4. Lee SH, Charoenying S, Brennan T, Markowski M, Mayo DR. Comparative studies of three serologic methods forthe measurement of Mycoplasma pneumoniae antibodies. Am J Clin Pathol 1989;92:342-7.

5. Kenny GE, Kaiser GG, Cooney MK, Foy HM. Diagnosis of Mycoplasma pneumoniae pneumonia: sensitivities andspecificities of serology with lipid antigen and isolation of the organism on soy peptone medium for identification ofinfections. J Clin Microbiol 1990;28:2087- 93.

6. Aubert G, Pozzetto B, Gaudin OG, Hafid J, Mbida AD, Ros A. Evaluation of five commercial tests: complementfixation, microparticle agglutination, indirect immunofluorescence, enzyme-linked immunosorbent assay and latexagglutination, in comparison to immunoblotting for Mycoplasma pneumoniae serology. Ann Biol Clin 1992;50:593

7. Kok T, Mickan LD, Burrell CJ. Routine diagnosis of seven respiratory viruses and Mycoplasma pneumoniae byenzyme immunoassay. J Virol Methods 1994;50:87-100.

8. Kleemola M, R?ty R, Karjalainen J, Schuy W, Gerstenecker B, Jacobs E. Evaluation of an antigen-captureenzyme immunoassay for rapid diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection. Eur J Clin Microbiol Infect Dis1993;12:872-5.  

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