牛磺酸检测：氨基乙磺酸（牛磺酸）检测试剂盒解决方案

牛磺酸，也称为2-氨基乙磺酸，是一种在各种动物组织中发现的小分子。牛磺酸是胆汁的主要成分，占人体总重量的近0.1%。与大多数含有较弱酸性羧基的生物酸不同，牛磺酸是一种磺酸，由于缺乏羧基，技术上它不是一种氨基酸。

牛磺酸通过一系列酶促反应在胰腺中从半胱氨酸生物合成：半胱氨酸的巯基被半胱氨酸双加氧酶氧化成半胱氨酸亚磺酸，半胱氨酸亚磺酸被亚磺酸脱羧酶脱羧形成次牛磺酸，次牛磺酸被次牛磺酸脱氢酶氧化形成牛磺酸。

牛磺酸在哺乳动物生物学中具有许多基本功能。牛磺酸与鹅去氧胆酸和胆酸结合形成胆汁盐牛磺鹅去氧胆酸和牛磺胆酸。牛磺酸的磺酸基团具有较低的pKa值，这使得该基团在肠道中带负电荷，因此改善了胆汁结合物的洗涤剂特性。牛磺酸对脂肪组织和心血管功能以及中枢神经系统、骨骼肌和视网膜的成熟和功能也很重要。

细胞生物实验室的牛磺酸检测试剂盒是一种简单的比色检测方法，用于在96孔微孔板格式中测量食物或生物样本中游离牛磺酸的总量。不检测结合分子中的牛磺酸（初级胆汁酸）。每个试剂盒提供足够的试剂进行多达200次检测*，包括空白、牛磺酸标准品、背景对照和未知样本。通过与已知牛磺酸标准比较来确定样本中的牛磺酸浓度。

该试剂盒的检测灵敏度限制为15.6 ?M牛磺酸。

*注意：每个样本重复需要进行2次检测，一次用停止液处理，一次用淬灭液处理。牛磺酸含量是根据两个孔的OD读数差异来计算的。

氨基乙磺酸（牛磺酸）检测试剂盒检测原理：

Cell Biolabs的牛磺酸检测试剂盒可测量食品或生物样本中的牛磺酸。牛磺酸是辅因子存在下牛磺酸双加氧酶氧化制备1-羟基-2-氨基乙磺酸分解为氨基乙醛和亚硫酸盐的酸。酶促反应通过以下方式终止添加EDTA（牛磺酸双加氧酶抑制剂）。然后用高度灵敏的检测器检测亚硫酸盐特异性比色硫醇探针。用标准96孔比色法读取样品和标准品印版阅读器。将样品与96孔内已知浓度的牛磺酸标准品进行比较微量滴定板格式。

艾美捷氨基乙磺酸（牛磺酸）检测试剂盒（MET-5071）组成：

Box 1（室温运输）

1. 牛磺酸标准品（部件编号50711C）：一支100微升的管子，浓度为100毫摩尔。

2. 10倍检测缓冲液（部件编号50712A）：一瓶10毫升。

3. 10倍试剂A（部件编号50713B）：一支1毫升的管子。

4. 10倍试剂B（部件编号50714A）：一支1毫升的棕色管。

5. 辅酶（部件编号50715A）：一支含有250毫克的棕色管。

6. 停止液（部件编号50717A）：一瓶5毫升。

7. 淬灭液（部件编号50718A）：一瓶5毫升。

Box 2（用蓝色冰袋运输）

1. 10倍牛磺酸双加氧酶（部件编号50716D）：一支含有大肠杆菌重组牛磺酸双加氧酶的1毫升管子。

2. 发展液（部件编号50719C）：一瓶10毫升。

未提供的材料：

1. 蒸馏水或去离子水

2. 1X PBS（磷酸盐缓冲液）

3. 标准96孔微孔板和/或细胞培养微孔板

储存：

收到后，将牛磺酸标准品、牛磺酸双加氧酶和发展液储存在-20?C。

将其余组分储存在4?C。

试剂的准备：

△1X检测缓冲液：将10X检测缓冲液用去离子水稀释至1X。搅拌至均匀。

存放在室温下。

△100X辅酶：称取至少6毫克的固体辅酶。在1X检测缓冲液中以6毫克/毫升的浓度通过涡旋彻底重悬。100X辅酶在重悬的前几分钟内颜色会变为鲜橙色，但在室温下稳定8小时。在下述反应混合物中使用前彻底混合100X辅酶。使用后8小时内丢弃未用的100X辅酶。

△反应混合物：通过将10X试剂A稀释1:10，10X试剂B稀释1:10，100X辅酶稀释1:100，以及牛磺酸双加氧酶稀释1:10在1X检测缓冲液中制备反应混合物。例如，向690微升的1X检测缓冲液中加入100微升的10X试剂A，100微升的10X试剂B，10微升的100X辅酶和100微升的牛磺酸双加氧酶，总体积为1毫升。这个反应混合物的体积足够进行20次检测。反应混合物在4?C下稳定1天。

注意：根据上述例子按比例准备仅足够立即使用的量。

样本的准备：

△组织裂解物：在冷的PBS或1X检测缓冲液中超声或均质化组织样本，然后在4°C下以10000 x g离心10分钟。在1X检测缓冲液中进行稀释。

△细胞裂解物：在PBS或1X检测缓冲液中将细胞重悬至1-2 x 10^6细胞/毫升。在冰上均质化或超声细胞。离心以去除碎片。细胞裂解物可以不稀释或根据需要在1X检测缓冲液中稀释后进行检测。

△尿液：为了去除不溶性颗粒，以10000转/分钟离心5分钟。上清可以不稀释或根据需要在1X检测缓冲液中稀释后进行检测。

△血清或血浆：通过离心过滤装置（例如使用Amicon Ultra 0.5毫升10K目录号UFC501024）对样本进行去蛋白处理，并收集流穿液。

为了去除不溶性颗粒，以10000转/分钟离心5分钟。上清可以不稀释或根据需要在1X检测缓冲液中稀释后进行检测。

注意事项：

所有样本应立即检测或储存在-80°C下长达1-2个月。根据需要运行适当的对照。样本的最佳实验条件必须由研究者确定。

总是与样本一起运行标准曲线。

结果示例：

下图显示了典型的牛磺酸检测试剂盒结果。应使用以下数据仅供参考。这些数据不应用于解释或计算实际的样本结果。

左图：牛磺酸标准曲线

右图：人尿液或血清中牛磺酸的检测。根据以下标准对未稀释的人体样本进行测试

测定方案（注：根据样品制备部分对人血清进行脱蛋白处理）。

氨基乙磺酸（牛磺酸）检测试剂盒相关产品：

1. MET-5053：总硫醇检测试剂盒（比色法）

2. MET-5054：L-氨基酸检测试剂盒（比色法）

3. MET-5070：甘氨酸检测试剂盒

4. STA-631：总胆汁酸检测试剂盒（比色法）

5. STA-674：谷氨酸检测试剂盒

文献参考：

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