从不同的生物或临床样本中可以提取的DNA或RNA数量差异很大。例如,虽然少量的DNA或RNA可以很容易地从过量的组织和细胞中纯化(例如从几毫克的组织中),但许多液体活检样本可能会产生极少量的DNA或RNA。事实上,每100μL的尿液或血浆等样品可能产生1-100 ng或更少的DNA或RNA。测得的浓度最常用的技术是在260 nm(A260)处测定吸光度。然而,即使是新一代的分光光度计,该方法的检出限仍高于2-10 ng/μL。其他技术,例如使用荧光核酸染色剂,已使每μL范围的ng或sub-ng更低的DNA或RNA定量成为可能。但是,这可能无法完全克服从液体活检中定量DNA或RNA的困难,因为预期的DNA或RNA产量可能在每μL范围内较低的pg或sub-pg。
有时候,qPCR实验会成为阻碍你课题顺利开展的强势拦路虎!看似简单的基因表达量差异验证,当遇到低丰富表达的基因时,也许就举步维艰。模板获取困难导致的RNA提取量少或RNA质量不佳,即使选用最佳的试剂、筛选出最良好的引物,也有可能qPCR定量得到的内参基因CT值在18-20个cycle,而目的基因在31-35个循环。遇到这种情况,你是怎么解决的呢?
基因的丰度是指基因在基因组中的绝对拷贝数。可分为高丰度,中等丰度和低丰度。低丰度是指目的基因在基因组中的拷贝数低,可简单认为2ng 总RNA中低于100个拷贝数的基因。从qPCR实验结果来讲,当扩增效率为100%,模板加入量在1-10ng范围内,qPCR得到的CT值高于28时即可认为低丰度基因。
如何进行低丰度核酸(DNA或RNA)的定量呢?艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商,为您推荐Norgen Biotek品牌的低丰度核酸(DNA和RNA)定量试剂盒。
产品名称及描述 | 货号 | 规格 | 试剂盒实物图 |
Low Abundance DNA Quantification Kit | 57200 | 48次反应 | |
Low Abundance RNA Quantification Kit | 58900 | 48次反应 |
低丰度核酸(DNA和RNA)定量试剂盒特点和优势:
定量分析各种浓度的DNA或RNA,包括更低浓度范围的ng/µL,pg/µL和sub-pg/µL;
与任何Real-Time PCR系统兼容;
通过使用提供的DNA或RNA标准品构建的标准曲线准确定量DNA或RNA。
【低丰度DNA定量试剂盒(货号57200),厂家测试结果】:
DNA定量的灵敏度:低丰度DNA定量试剂盒与其他方法相比。上图代表不同DNA定量方法的动态范围。该试剂盒可以定量从pg和sub-pg范围内的低丰度样品中纯化的DNA。
使用低丰度DNA定量试剂盒在皮克范围内进行DNA定量的灵敏度。代表性qPCR基线图显示了DNA标准品稀释梯度的扩增。 可以从低丰度样品如液体活检样品(如血浆或尿液)中定量纯化的DNA。使用Norgen的试剂盒可定量至500 fg的DNA。
【低丰度RNA定量试剂盒(货号58900),厂家测试结果】:
RNA定量的灵敏度:低丰度RNA定量试剂盒(货号58900)与其他方法相比。上图代表不同RNA定量方法的动态范围。该试剂盒可以定量从pg和sub-pg范围内的低丰度样品中纯化的RNA。
使用低丰度RNA定量试剂盒在皮克范围内进行RNA定量的灵敏度。代表性qPCR基线图显示了RNA标准品稀释梯度的扩增。可以从低丰度样品如液体活检样本(如血浆或尿液)中定量纯化RNA。可以定量低至500 fg的RNA。
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Norgen Biotek成立于1998年,公司总部位于加拿大,是一家著名全球化生物技术公司,生产基于专利技术的核酸和蛋白质纯化及富集产品用于研究和诊断。Norgen Biotek 在2003年获得加拿大国家研究委员会颁发的科技创新奖,是一家致力于样品制备并获得ISO 9001(产品质量)、ISO 13485(产品可用于商业化的医疗设备,包括用于体外诊断领域)和ISO 15189(可用于临床检测机分子诊断领域的研发能力)认证的生物科技公司。目前该公司的产品多达700余种,提供一流的样品制备试剂盒,应用于基因组和蛋白组等不同的领域。
艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。
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