QA-Bio-DMB唾液酸标记试剂盒的特性和应用

QA-Bio-DMB唾液酸标记试剂盒包含两套标记试剂和一套唾液酸参考板：

标准品：

NeuAc和NeuGc定量标准品

唾液酸参考板

释放和标记试剂

DMB染料（1,2-二氨基-4,5-亚甲二氧基苯.2HCl）：

醋酸

醋酸中的巯基乙醇

次亚硫酸钠（还原剂）

唾液酸对于治疗性糖蛋白的稳定性和三维构象非常重要。已经证明它们影响糖蛋白在血清中的半衰期，并通过这些生物治疗剂影响患者的抗炎和免疫反应。基于这些原因，监测这些治疗性糖蛋白上发现的唾液酸的水平和类型至关重要。

艾美捷QA-Bio-DMB唾液酸标记试剂盒（LT-KDMB）提供了从糖蛋白中释放唾液酸并用DMB进行标记所需的一切。试剂盒包含用于22个或96个糖蛋白样品（每个样品50-100微克糖蛋白）的试剂和材料。每次标记应该能够处理每个样品大约10皮摩尔到2.5纳摩尔的唾液酸。

QA-Bio-DMB唾液酸标记试剂盒中包括一个唾液酸参考板（包含Neu5Ac；Neu5Gc；Neu5,7Ac2；Neu5,Gc9Ac；Neu5,9Ac2；Neu5,7,(8),9Ac3Gc）以及NeuAc和NeuGc定量标准品。这三种标准品可以与释放的唾液酸样品一起用DMB进行标记。NeuAc和NeuGc定量标准品的连续稀释准备使定量分析成为可能。

作为阳性对照，建议使用QA-Bio的胎蛋白糖蛋白，它包含NeuAc和NeuGc唾液酸，和/或作为阳性对照的定量糖肽（BQ-GPEP-A2G2S2-10U）。水可以用作阴性对照。

唾液酸的释放 从糖蛋白中释放唾液酸是通过温和的酸水解进行的。样品和对照在80°C下用2M醋酸孵育2小时。

唾液酸标记反应 释放的唾液酸用1,2-二氨基-4,5-亚甲二氧基苯-2HCl（DMB）进行荧光标记。酸水解样品和过程对照加上Ludger唾液酸标准品：Neu5Ac、Neu5Gc、唾液酸参考板，如果使用的话还有Neu5,9Ac2，在50°C下用DMB孵育3小时。

通过HPLC或UHPLC分析 利用Neu5Ac和Neu5Gc标准品计算标准曲线。唾液酸参考板和Neu5,9Ac2用于唾液酸鉴定。可以使用LudgerSep R1x150mm色谱柱进行HPLC分析，或使用LudgerSep uR2x100mm色谱柱通过UHPLC进行分析。

QA-Bio-DMB唾液酸标记试剂盒文献参考：

Thomson RI, Gardner RA, Strohfeldt K, Fernandes DL, Stafford GP, Spencer DIR, Osborn HMI. Analysis of Three Epoetin Alpha Products by LC and LC-MS Indicates Differences in Glycosylation Critical Quality Attributes, Including Sialic Acid Content. Anal Chem. Jun 20;89(12):6455-6462.( 2017)

艾美捷科技是QA-Bio的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。