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QA-Bio-2-AB标记试剂盒,一种明显更安全的还原剂

发布者:艾美捷科技    发布时间:2024-07-05     
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传统的2-AA和2-AB标记试剂盒在糖苷标记过程中使用氰硼氢化钠作为还原剂。这种试剂是有毒的,因此在操作时应使用通风柜。为了符合新兴的健康和安全法规,用新的VP糖苷试剂盒替换它们,该试剂盒使用的是苯并吡啶硼烷,这是一种明显更安全的还原剂。

 

QA-Bio-2-AB标记试剂盒包含以下试剂的两套(每个试剂盒可处理15个样本),存放在纯氮气下密封的玻璃安瓿中:

LT-KAB-A2

2-氨基苯甲酰胺(2-AB染料)

二甲基亚砜(DMSO)

醋酸

氰硼氢化钠

 

LT-KAB-VP24

2-氨基苯甲酰胺(2-AB染料)

二甲基亚砜(DMSO)/醋酸溶液

2-苯并吡啶硼烷

QA-Bio-2-AB

艾美捷QA-Bio-2-AB标记试剂盒:

货号:LT-KAB

样本数量:一个2-AB标记试剂盒包含的试剂足以标记每个试剂盒多达30个独立的分析样本

染料纯度: >99%(高效液相色谱法)

分子量: 137

激发波长: λex 250 nm

发射波长: λem 428 nm

样本量 :每个样本从25皮摩尔到25纳摩尔的糖苷。

适用样本: 任何具有自由还原末端的纯化糖苷都可以被标记。

结构完整性 :未检测到(<2摩尔百分比)唾液酸、岩藻糖、硫酸或磷酸的损失。

标记效率 :通常>85%(取决于样本)。

标记选择性: 基本上是化学计量的标记。

 

协议:

1.纯化糖苷:LudgerClean EB10柱(LC-EB10-A6)设计用于从蛋白质、盐和洗涤剂中纯化糖苷。

2.将样本转移到反应瓶中:对于从典型糖蛋白中获得的糖苷池,样本量应在100皮摩尔至50纳摩尔的范围内。即使是单一纯糖苷,只要低至5皮摩尔也可以在随后的高效液相色谱(HPLC)分析中被标记和检测。合适的反应瓶包括小型聚丙烯微量离心管和PCR工作用管。

3.干燥样本:如果样本体积超过10微升,则需要将样本干燥。如果需要将样本干燥,则应使用离心蒸发仪进行。如果这不可能,则可以谨慎使用冷冻干燥(真空干燥),特别是要确保样本在管底干燥成一个小的、紧凑的团块。不要将样本暴露于高温(>28°C)或极端pH值,因为这些条件会导致酸性催化的唾液酸损失(高温、低pH)或糖苷还原末端的表观异构化(在高pH值时)。

一旦样本干燥,然后在10微升的水中重新溶解糖苷。

4.(仅限LT-KAB-A2)准备DMSO-醋酸混合物:向DMSO的瓶中加入150微升的冰醋酸,并通过移液管混合。

5.添加染料:将DMSO-醋酸混合物加入2-AB(2-氨基苯甲酰胺酸)染料的瓶中,混合直至染料溶解。

6.添加还原剂:将溶解的染料加入氰硼氢化钠或苯并吡啶硼烷的瓶中,并通过移液管混合,直至还原剂完全溶解,制成最终的标记试剂。

7.将标记试剂加入样本:将标记试剂加入每个干燥的糖苷样本中,盖紧微管,彻底混合。

8.孵化:将反应瓶放入加热块、沙浴或设置在65°C的干燥箱中孵化3小时。在大多数情况下,孵化时间可以缩短至2小时或延长至4小时,而不会显著改变标记反应的结果。

9.离心和冷却:孵化期结束后取出样本,简短离心微管,然后让它们完全冷却至室温。

10.样本清洁:建议在标记后进行样本清洁,以去除多余的染料和其他标记试剂。可以使用LudgerClean T1柱(LC-T1-A6)或S柱(LC-S-A6)进行清洁。

 

QA-Bio-2-AB标记试剂盒文献参考:

Anumula KR, Dhume ST. High resolution and high sensitivity methods for oligosaccharide mapping and characterization by normal phase high performance liquid chromatography following derivatization with highly fluorescent anthranilic acid. Glycobiology 8 685-694(1998)

 

艾美捷科技是QA-Bio的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。


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