QA-Bio-Orela O-连接甘氨酸释放试剂盒包括进行多达12个糖蛋白样品的O-连接去糖基化的试剂和材料,这些样品可以并行分析,或者分为两组,每组6个样品,通常每个样品的糖蛋白量高达1毫克。这种O-糖链释放方法显著减少了剥离现象,并减少了释放前的样品处理步骤。
专为QC实验室设计的简单O-连接去糖基化。
直接且简单的方法。
释放的糖链具有自由还原末端,适合在HPLC和MS分析前进行荧光标记。
荧光标记允许通过HPLC对糖链物种进行相对定量。
比水合肼法(LL-HYDRAZ-A2)更快、成本更低。
不需要特殊的处理技巧。
Orela反应:
Orela试剂在糖链与肽主链之间的连接处反应,将糖链作为糖基胺释放。酸不稳定的糖基胺衍生物被水解,产生自由的糖链。
艾美捷QA-Bio-QA-Bio-Orela O-连接甘氨酸释放试剂盒(LL-ORELA-A2)内容:
Part # Item Quantity
LL-ORELAREAGENT-0 Orela Release Reagent 2 x 3ml
LL-ACETIC-50P-01 Acetic Acid Solution 2 x 3ml
LC-CEX-H-01 LudgerClean CEX-H cartridges 2 x 6 cartridges
LL-COLLV-01 Collection vials with PTFE lined caps 2 x 6 vials
LL-REACT-01 Reaction vials with PTFE lined caps 2 x 6 vials
QA-Bio-QA-Bio-Orela O-连接甘氨酸释放试剂盒:
准备糖缀合物:通过去除可能干扰标记程序的污染物,如盐分、洗涤剂和染料,准备糖蛋白或糖肽样品。
干燥糖链:将样品置于反应瓶中并干燥。
向糖缀合物中添加释放试剂:向每个样品中添加Orela释放试剂。
孵育:孵育样品以允许释放反应进行。
酸化:添加醋酸溶液并在4°C下孵育,以将糖基胺转化为非还原糖链
释放后清洁:使用阳离子交换柱去除肽或蛋白质
储存或分析释放的糖链:现在释放的糖链已准备好进行分析。
QA-Bio-QA-Bio-Orela O-连接甘氨酸释放试剂盒文献参考:
Kozak RP, Royle L, Gardner RA, Bondt A, Fernandes DL, Wuhrer M Improved nonreductive O-glycan release by hydrazinolysis with ethylenediaminetetraacetic acid addition. Anal Biochem. May 15;453:29-37 (2014).
Kozak RP, Royle L, Gardner RA, Fernandes DL, Wuhrer M. Suppression of peeling during the release of O-glycans by hydrazinolysis. Anal Biochem. 2012 Apr 1;423(1):119-28.
Sojar, H. T. and O.P. Bahl. A chemical method for the deglycosylation of proteins. Arch Biochem Biophys 259:52-57 (1987).
Turyan I, Hronowski X, Sosic Z, Lyubarskaya Y. Comparison of two approaches for quantitative O-linked glycan analysis used in characterization of recombinant proteins. Anal Biochem. Feb 1;446:28-36 (2014)..
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