Cell Biolabs自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量)方案

自噬是细胞质物质的溶酶体降解途径，在细胞应激期间被激活。在被病毒感染或氨基酸饥饿等应激信号诱导后，自噬的第一步是形成自噬体。发表最多的自噬体标记蛋白是MAP LC3，它与自噬体的内限制膜和外限制膜相关。

蛋白质印迹法可以看到两种形式的LC3：LC3I存在于可溶性级分中，LC3II存在于膜级分中。这两种形式都可见于健康细胞，但在自噬过程中LC3II的比例急剧增加。

LC3是一种16-18kDa的小蛋白，在细胞内以3种形式存在。125个氨基酸的前体被切割成120个氨基酸的形式，称为LC3-I。在与磷脂酰乙醇胺（PE）结合后，产生LC3-II形式。LC3-I主要存在于胞质溶胶中，而LC3-II主要存在于膜部分中。

在通过应激信号（如氨基酸饥饿）诱导自噬后，第一步是形成自噬体。LC3-I和LC3-II都存在于健康细胞中，但在自噬诱导后，LC3-II的比例随着与自噬体膜的结合而增加。

艾美捷代理Cell Biolabs自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量)使用选择性透化程序来去除胞浆pro-LC3和LC3-I，并保留自噬体膜结合的LC3-II。未知裂解物中LC3-II的量通过与已知LC3标准曲线进行比较来确定。特点如下：

1、在耗尽胞质LC3-I后定量细胞裂解物中的LC3-II

2、包含重组LC3标准品

艾美捷Cell Biolabs的细胞自噬ELISA试剂盒（LC3-II Quantation）是一种用于检测和定量培养细胞中LC3的酶免疫分析。该试剂盒利用选择性渗透程序去除胞浆前LC3和LC3-I，并保留自噬体膜结合的LC3-II（图1）。在固定和透化后，用抗LC3抗体探测含有LC3-II的细胞，然后用HRP缀合的第二抗体探测。每个试剂盒提供足够的试剂来进行多达48次测定。

图1:LC3的处理。在自噬过程中，前-LC3经历C末端蛋白水解形成LC3-I（胞浆）。LC3-I蛋白与磷脂酰乙醇胺（PE）结合并易位到自噬体膜（LC3-II）。选择性透化程序用于去除胞质前LC3/LC3-I并保留自噬体结合的LC3-II。LC3-II被用作自噬的特异性标记

试剂盒组成：

1. 100X Cytosolic LC3 Removal Reagent (Part No. 51171A): One 100 ?L tube.

2. 2X Fixing Solution (Part No. 51172B): One 10 mL bottle containing 8% paraformaldehyde.

3. Quenching Solution (Part No. 51173B): One 10 mL bottle.

4. Anti-LC3 Antibody (Part No. 51174C): One 10 ?L tube.

5. Secondary Antibody, HRP Conjugate (1000X) (Part No. 231009): One 20 ?L tube.

6. Assay Diluent (Part No. 310804): One 50 mL bottle.

7. 10X Wash Buffer (Part No. 310806): One 100 mL bottle.

8. Substrate Solution (Part No. 310807): One 12 mL amber bottle.

9. Stop Solution (Part. No. 310808): One 12 mL bottle.

10. Cell Stain Solution (Part No. 11002): One 10 mL bottle.11. Extraction Solution (Part No. 11003): One 10 mL bottle

相关研究：

1.CBA-401: GFP-LC3 Expression Vector

2.CBA-5115: Autophagy Immunoblot Kit (LC3-II Detection)

3. CBA-5116: Autophagy ELISA Kit (LC3-II Quantitation)

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