QA-Bio-Endo F多功能试剂盒的多种应用范围介绍

Endo F Multi-kit 推荐用于去除那些由于糖链在蛋白质三维结构中的位置，在非变性条件下抵抗PNGase F裂解的天然蛋白质的糖基。众所周知，这些酶对蛋白质构象的敏感性较低。

每种酶具有不同的N-连接糖链特异性：

内切糖苷酶F1（Endoglycosidase F1）裂解高甘露糖和某些杂合型N-连接糖链。

内切糖苷酶F2（Endoglycosidase F2）释放双天线和高甘露糖糖链（速率降低40倍）。

内切糖苷酶F3（Endoglycosidase F3）将释放三天线和岩藻糖基化的双天线N-连接糖链。

艾美捷QA-Bio-Endo F多功能试剂盒（KE-EFX3）应用范围：

去除天然蛋白质中抵抗PNGase F裂解的糖基。

确定糖链类型（高甘露糖、双天线、三/四天线）。

去除在去糖基化时通常沉淀的蛋白质中的糖基。

X射线晶体学。

QA-Bio-Endo F多功能试剂盒使用说明：

向Eppendorf管中添加多达200微克的糖蛋白。用去离子水调整至最终体积34微升。

添加10微升Endo F2/F3 5倍反应缓冲液，250 mM 醋酸钠 pH 4.5。如果单独使用Endo F1酶，请使用Endo F1缓冲液，250 mM 磷酸钠 pH 5.5。

向反应中添加每种酶2.0微升。在37°C下孵化3小时。 通过SDS-PAGE监测裂解情况。

QA-Bio-Endo F多功能试剂盒文献参考：

Maley P., R. B. Trimble, A. L. Tarentino and T. H. Plummer Jr. Characterization of glycoproteins and their associated oligosaccharides through the use of endoglycosidases. Anal Biochem 180:195-204 (1989).

Plummer, T. H. Jr, A. W. Phelan and A. L. Tarentino. Porcine fibrinogen glycopeptides: substrates for detecting endo-N-acetylglucosaminidases F2 and F3. Anal Biochem 235:98-101 (1996).

Tarentino A. L., G. Quinones, L. M. Changchien, and T. H. Plummer Jr. Multiple endoglycosidaseF activities expressed by Flavobacterium meningosepticum endoglycosidases F2 and F3: Molecular cloning, primary sequence, and enzyme expression. J Biol Chem 268(13):9702-9708 (1993).

Tarentino A. L. and T. H. Plummer Jr. Substrate specificity of Flavobacterium meningosepticum: Endo F2 and endo F3: purity is the name of the game. Glycobiology 4:771-773 (1994).

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