酮体比色测定试剂盒的存储说明，及样本示例分析

β-羟丁酸（β-HB；3-羟基丁酸）是一种“酮体”。“酮体”一词指的是三种分子：乙酰乙酸、β-HB和丙酮。β-HB和乙酰乙酸将能量从肝脏输送到其他组织，而丙酮是由乙酰乙酸自发脱羧产生的。正常的酮症在许多情况下很常见，如在禁食期间、长时间运动后或高脂饮食后。病理性酮症的原因包括多器官衰竭、糖尿病、儿童低血糖、皮质类固醇或生长激素缺乏、酒精或水杨酸盐中毒以及几种先天性代谢错误。

在急性病患者中，这些酮体可以在体内积累，导致酮症酸中毒，这可能导致潜在危及生命的情况，即代谢性酸中毒。酮症的存在和程度可以通过测量血液中的β-HB水平来确定。通常，β-HB约占血清中酮体的75%。测量β-HB提供了酮症水平的可靠指标，包括亚临床酮症的检测。在糖尿病患者中，β-HB测量（和血糖）可用于评估糖尿病昏迷的严重程度，并且对于排除高渗非酮症糖尿病昏迷至关重要。β-HB的测量也用于根据现有的高酮血症监测胰岛素需求。β-HB最近还用于评估在神经退行性疾病和抑制脂肪细胞脂解中的应用。

艾美捷Biogradetech的酮体比色测定试剂盒（BGT-KAT-200）提供了一种简单、可重复和灵敏的工具，用于测量血浆、血清、尿液、细胞裂解物或组织匀浆中的β-HB水平。β-HB的测定方法基于3-羟基丁酸脱氢酶将D-3-羟基丁酸氧化为乙酰乙酸盐。16伴随着这种氧化，辅因子NAD+被还原为NADH。在黄递酶的存在下，NADH与比色检测器WST-1反应，产生吸收Z大值为445-455nm的甲赞染料。染料的吸光度与β-HB浓度成正比。

储存与稳定性：如果将此试剂盒储存在-20°C并在盒子外部标明的有效期之前使用，则试剂盒将按照规定的性能执行。

需要但不提供的物料：

1. 能够测量445-455纳米吸光度的板式阅读器。

2. 可调节移液管和可重复使用的移液器。

3. 纯净水源；玻璃蒸馏水或HPLC级水是可以接受的。

样本准备：

血浆和血清中的β-HB浓度可以在相当宽的范围内变化，正常水平测量为0.02-1.5 mM，在糖尿病患者中可增加至高达3-5 mM。在糖尿病酮症酸中毒期间，尿液中的β-HB浓度可能高达30-50 mM。

血浆：

1. 使用肝素、EDTA或柠檬酸盐等抗凝剂采集血液。

2. 将血液在4°C下以700-1,000 x g的速度离心10分钟。用移液管取上层黄色血浆层，不要扰动白色纤维层。将血浆存放在冰上。如果不在同一天进行检测，则在-80°C下冷冻。血浆样本在-80°C下储存时可稳定一个月。

3. 在检测前应通过10 kDa MWCO离心过滤器（遵循制造商的协议）对血浆进行过滤。

血清：

1. 无需使用抗凝剂采集血液。

2. 让血液在25°C下凝固30分钟。

3. 将血液在4°C下以2,000 x g的速度离心15分钟。用移液管取上层黄色血清层，不要扰动白色纤维层。将血清存放在冰上。如果不在同一天进行检测，则在-80°C下冷冻。血清样本在-80°C下储存时可稳定一个月。

4. 在检测前应通过10 kDa MWCO离心过滤器（遵循制造商的协议）对血清进行过滤。

尿液：

尿液的收集不需要任何特殊处理。如果不在同一天进行检测，则在-80°C下冷冻。

建议使用Cayman的肌酸酐ELISA试剂盒（货号502330）、肌酸酐（尿液）比色法检测试剂盒（货号500701）或类似的检测方法，将从尿液样本中获得的值标准化为肌酸酐水平。

酮体比色测定试剂盒示例矩阵属性：

尖峰与恢复：

人血浆和尿液中添加了不同量的β-HB。血浆样本按照样本准备部分描述的方法进行了过滤，并在检测中进行了验证。尿液样本进行了连续稀释，并在检测中进行了验证。误差条代表每个样本多次稀释的标准偏差。

人血浆和尿液中β-羟基丁酸的峰值和回收

酮体比色测定试剂盒部分文献参考：

1. MacGillivray, M.H., Li, P.K., Lee, J.T., et al. J Clin Endocrinol Metab 54(3),665-668 (1982).

2. Alberti, K.G.M.M. and Hockaday, T.D.R. Br. Med. J. 2, 565-568 (1972).

3. Kashiwaya, Y., Takeshima, T., Mori, N., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(10),5440-5444 (2000)