Jackson ImmunoResearch有关抗体的具体问题分析（FAQ）

针对Jackson ImmunoResearch抗体的一些具体问题，目前艾美捷总结了五点，如下：

1. 西方印迹（Western blot）

如何避免检测免疫沉淀（IP）抗体的重链？

Jackson ImmunoResearch提供针对IgG轻链的特异性抗体，以避免检测IP抗体的重链（50 kDa）。

如何避免检测免疫沉淀（IP）抗体的轻链？

可以使用针对IgG Fc片段的特异性抗体来避免检测IP抗体的轻链（25 kDa）。然而，样本还原通常会导致少量降解的重链在25 kDa处产生，必须使用FabuLight?抗体来阻断这些片段的信号。

2. 酶联免疫吸附测定（ELISA）

推荐的涂层条件是什么？

为确保彻底涂层，Jackson ImmunoResearch建议使用10微克/毫升的蛋白质在高pH缓冲液中，例如0.1 M Na2CO3/NaHCO3，pH 9.6。

3. 免疫组织/细胞化学（IHC/ICC）

在小鼠组织/细胞上可视化小鼠来源的一级抗体需要哪些试剂？

在小鼠对小鼠染色中，可以使用单价Fab片段来阻断内源性免疫球蛋白的不需要信号。

有哪些试剂可以用来提高荧光探针的光稳定性？

许多商业化的封埋介质含有抗褪色试剂。实验室也可以自行准备含有丙酸丙酯的抗褪色封埋介质。

在选择Cy2的封埋介质时应该注意什么？

Cy2与p-苯二胺不兼容，这是一种抗褪色试剂，存在于一些商业封埋介质中，如Vectashield。确保Cy2封埋介质中不含p-苯二胺。

在永久封埋介质中最稳定的荧光团是什么？

青色素已被证明在塑料封埋介质的非极性环境中具有优越的亮度和光稳定性。

在选择多重标记协议的荧光团时应该考虑什么？

在选择多重标记的荧光团时，审查仪器的能力（可用的激发波长和发射滤光片）。窄带通滤光片有助于从具有重叠发射光谱的荧光团中分离信号。网上有工具可以帮助选择荧光染料组合，并与合适的滤光片匹配。

成功的多重标记还需要使用不互相交叉反应的二级抗体，不对的一级抗体，或内源性组织免疫球蛋白。

4. 流式细胞术

我应该为流式细胞术选择哪种二级抗体格式？

在免疫测定中使用多克隆二级抗体缀合物通常比直接缀合的一级抗体提供更强的信号，因为每个一级抗体可以结合多个二级抗体。

F(ab')2抗体在流式细胞术分析中是理想的选择，因为Fc受体的存在可能会导致背景，因为它们会结合整个IgG抗体的Fc区域。F(ab')2抗体的结合特性与整个分子相同。

对于复杂的标记组合，如果希望将预标记的一级抗体混合在单一混合物中，FabuLights?（单价Fab抗Fc抗体）非常适合。

在小鼠细胞上可视化小鼠来源的一级抗体需要哪些试剂？

使用直接标记的一级抗体是避免检测内源性免疫球蛋白的最佳方法，当一级抗体与实验样本来自同一物种时。

如果需要二级抗体进行检测，可以使用单价Fab片段来阻断内源性免疫球蛋白的不需要信号。

什么是同型对照，它如何使用？

同型对照是一种阴性对照，用于验证一级或二级抗体的特异性结合。同型对照与实验抗体属于同一类别或亚类，但不是针对抗原目标的。同型对照可以从实验抗体的宿主物种的正常血清中纯化；或者在单克隆抗体的情况下，可以是针对不相关抗原的同一亚类的单克隆抗体。未标记抗体的同型对照是未标记的，标记抗体的对照与实验抗体使用相同的报告分子（荧光团或生物素）进行标记。

在流式细胞术中了解更多关于同型对照的信息。

在选择荧光探针时应考虑什么？

在选择流式细胞术的荧光团时，审查仪器上可用的荧光通道。在线工具方便帮助选择荧光染料组合。

5. 电子显微镜

各种应用推荐使用什么大小的金颗粒？

Jackson ImmunoResearch提供4、6、12和18纳米大小的免疫金复合物。对于许多应用来说，颗粒大小并不关键，试剂可以互换。

6、12和18纳米大小推荐用于透射（TEM）和扫描（SEM）电子显微镜中的多重标记协议。这些复合物经过密度梯度处理，确保颗粒大小的均匀性。4纳米大小可以用于电子显微镜中的单一标记，但可能包含不均匀的颗粒。

4纳米免疫金复合物提供了最佳的组织穿透力，通常更受光显微镜（LM）的青睐。大尺寸的也适合LM。所有免疫金试剂都需要银增强才能用于LM。

应该如何储存胶体金复合物？

将液态胶体金复合物（6、12和18纳米）储存在-20°C。将冻干金复合物（4纳米）储存在4°C，直到它们重新水化。

何时应在协议中包含银增强？

需要银增强来观察光显微镜下的免疫金染色。请按照Jackson ImmunoResearch的银增强协议操作，或使用商业化试剂。