免疫级牛源II， IX 和 XI 型胶原蛋白实验方法说明

发布者：艾美捷科技发布时间：2024-11-15

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自主神经系统（Autonomic Nervous System, ANS）与免疫系统之间存在着密切的联系。ANS通过神经纤维直接支配淋巴器官，包括脾脏，从而提供了中枢神经系统（CNS）与免疫系统之间的桥梁。在脾脏中，已知的唯一神经抑制炎症的机制依赖于由脾脏去甲肾上腺素能纤维产生的去甲肾上腺素，这种去甲肾上腺素与CD4+ T细胞上的β2肾上腺素能受体（β2-ARs）结合，进而触发乙酰胆碱的释放。乙酰胆碱随后通过与髓样细胞上的α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChRs）结合，抑制炎症细胞因子的分泌。尽管迷走神经抗炎通路在啮齿类动物中得到了广泛研究，但尚不清楚是否还存在其他神经通路。

“Apical splenic nerve electrical stimulation discloses an anti-inflammatory pathway relying on adrenergic and nicotinic receptors in myeloid cells”旨在探讨脾脏神经在调节炎症中的作用，并确定是否存在除迷走神经抗炎通路之外的其他神经通路。特别地，研究关注于脾脏神经的解剖和功能特性，以及电刺激这些神经对炎症的影响。

实验方法：

1. 动物模型与分组：实验使用了多种小鼠品系，包括C57BL/6、DBA、Foxn1-/-（T细胞缺陷）、Rag1-/-（T和B细胞缺陷）、LysM-Cre:Adrb2fl/fl（髓系细胞β2-ARs敲除）、LysM-Cre:Chrna7fl/fl（髓系细胞α7nAChRs敲除）等。实验分为多个组别，包括假手术组（SHAM）、不同神经刺激组（如迷走神经刺激、动脉脾神经刺激、顶端脾神经刺激）以及不同基因敲除小鼠组。

2. 神经刺激与参数：使用特制的电极对小鼠的迷走神经、动脉脾神经或顶端脾神经进行电刺激。刺激参数为矩形双相脉冲，脉冲幅度为650 ?A，脉冲宽度为100 ?s，频率为10 Hz，持续时间为2分钟。

3. 生理指标监测：在麻醉小鼠中监测颈动脉血压和心率，以评估神经刺激对心血管系统的影响。

4. 炎症模型与评估：使用脂多糖（LPS）诱导小鼠内毒素血症模型，通过检测血清中肿瘤坏死因子（TNF）水平评估炎症反应。此外，还使用了chondrexII型胶原（货号20022）和与弗氏完全佐剂（货号:7009，完全弗氏佐剂，2mg/ml）混合后免疫DBA小鼠，成功诱导了关节炎，通过临床评分、组织病理学分析等方法评估关节炎的严重程度。

免疫级牛源II， IX 和 XI 型胶原蛋白

如上图：DBA小鼠在第0天用II型胶原蛋白进行免疫接种，并将电极植入第11天脾脏顶部的脾神经。在第21天，用II型胶原蛋白对小鼠进行加强免疫在35天内每2-3天监测一次临床症状。数据显示关节炎小鼠的百分比（a），平均临床评分（b）和平均厚度后爪（c）。

实验结果：

1. 神经解剖与功能分析：通过免疫组织化学和激光共聚焦显微镜观察，发现小鼠脾脏有三条神经分支：两条与动脉相关，包含儿茶酚胺能纤维；另一条位于脾脏顶端，同时包含儿茶酚胺能纤维和胆碱能纤维。电刺激顶端神经而非动脉神经能显著增加脾脏中ACh的含量，且这种增加不依赖于T细胞。

2. 神经刺激对炎症的抑制作用：电刺激迷走神经、动脉脾神经或顶端脾神经均能抑制LPS诱导的TNF产生，但机制不同。迷走神经和动脉脾神经刺激依赖于T细胞，而顶端脾神经刺激不依赖于T细胞，且其抑制作用可被β2-ARs和α7nAChRs的拮抗剂所阻断，表明顶端脾神经刺激通过平行作用于髓系细胞上的β2-ARs和α7nAChRs来抑制炎症。

3. 顶端脾神经刺激对CIA的抑制作用：在CIA小鼠中，电刺激顶端脾神经显著延迟了关节炎的发病时间，减轻了疾病严重程度，减少了关节肿胀和骨侵蚀，并降低了脾脏中炎症性单核细胞的数量。这些结果表明，顶端脾神经刺激可能通过抑制全身炎症反应来减轻关节炎症状。

在本研究中，Chondrex的牛II型胶原被用于建立胶原诱导的关节炎（CIA）模型。该模型是关节炎研究中的经典模型之一，能够模拟关节炎的病理特征和临床表现。牛II型胶原作为CIA模型的诱导剂，通过与弗氏完全佐剂混合后注射到小鼠体内，成功诱导了关节炎的发生和发展。

艾美捷免疫级牛源II， IX 和 XI 型胶原蛋白（免疫接种级别）：

20011 Immunization Grade Chick Type II Collagen, 10 mg, lyophilized

20012 Immunization Grade Chick Type II Collagen, 2 mg/ml x 5 ml

20021 Immunization Grade Bovine Type II Collagen, 10 mg, lyophilized

20022 Immunization Grade Bovine Type II Collagen, 2 mg/ml x 5ml

20031 Immunization Grade Porcine Type II Collagen, 10 mg, lyophilized

20032 Immunization Grade Porcine Type II Collagen, 2 mg/ml x 5ml

20041 Immunization Grade Rat Type II Collagen, 5 mg, lyophilized

20042 Immunization Grade Rat Type II Collagen, 2 mg/ml x 2.5 ml

20051 Immunization Grade Human Type II Collagen, 1 mg, lyophilized