Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)用于检测低氧浓度条件下的生物反应

Hypoxyprobe?-F6试剂盒组件的详细描述：

Hypoxyprobe?-F6 (CCI-103F)是一种六氟取代的2-硝基咪唑，具有六个磁等价的氟原子；分子量为337.2；水溶性为5.3毫摩尔，相当于1.8毫克/毫升。CCI-103F通常以10%二甲基亚砜/花生油混合物腹腔给药（Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005）。在避光条件下储存时，CCI-103F非常稳定。

CCI-103F在缺氧细胞中被还原激活。激活的中间体与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基（硫醇）基团形成稳定的共价加合物。初级抗CCI-103F抗血清与这些加合物结合，允许通过免疫化学方法进行检测。

抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6）与还原激活的CCI-103F的蛋白质加合物结合，并作为稀释的兔抗血清供应，含有0.09%的叠氮钠和1%的牛血清白蛋白作为稳定剂。感兴趣的组织可以通过对福尔马林固定的石蜡包埋切片或冷冻固定切片进行免疫组织化学研究，通过组织解离后的流式细胞术，或通过Western blotting进行研究。抗CCI-103F抗血清与CCI103F的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但组织处理在准备免疫组织化学测定时会冲洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫组织化学检测仅依赖于缺氧组织中CCI103F的蛋白质加合物。

在福尔马林固定的石蜡包埋组织切片上进行免疫过氧化物酶分析，涉及将组织切片与大约1:500稀释的抗CCI-103F抗血清100微升孵育。然后应用色原性山羊抗兔二抗以显示缺氧标记物加合物的分布。下面提供了一个详细的免疫过氧化物酶协议作为一般指南，但强调Hypoxyprobe?技术是稳健的，鼓励研究者自行修改。请参阅Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005及其中引用的关于冷冻切片的研究。

艾美捷Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)：

货号：HPB-CCI-103F-250mg

应用：使用Hypoxyprobe?-F6试剂盒通过免疫化学检测手段，包括免疫过氧化物酶、免疫荧光或流式细胞术，来测量组织和细胞中的缺氧。（参见Kleiter等人，Int. J. Radiation Oncol. Biol. Phys. 64(2): 592-602, 2006；Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005）。

数量：a. Hypoxyprobe?-F6试剂盒分别包含100、200或1000毫克的CCI-103F（Hypoxyprobe?-F6）。在小动物研究中通常使用的剂量是每公斤体重60毫克。

b. 每个试剂盒包含稀释的抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6），其中含有0.09%的叠氮钠和1%的牛血清白蛋白作为稳定剂。100毫克和200毫克的试剂盒各含有一个200微升的抗血清单位；1000毫克的试剂盒含有两个200微升的抗血清单位。抗血清的最佳工作稀释度需由研究者确定，但1/200至1/500的稀释度在使用过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗血清时能给出强烈的免疫过氧化物酶染色。

不提供：抗兔二抗试剂或其他免疫组织化学试剂（缓冲液、抗原修复剂等）。

储存：a. 将Hypoxyprobe?-F6存放在室温下的暗处（也可以存放在2-8摄氏度）。

b. 将兔抗血清（PAbF6）存放在2-8摄氏度。

Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)检测说明：

啮齿动物中标记物研究始于将CCI-103F溶解在10%二甲基亚砜/90%花生油中，通过静脉或腹腔注射给药（参见Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005），剂量为每公斤体重60毫克。六十至一百二十分钟后，收获感兴趣的组织。CCI-103F的剂量为每公斤体重60毫克，在摩尔基础上比Hypoxyprobe提供的另一种缺氧标记物匹莫尼达唑盐酸盐的剂量要低，但CCI-103F的血浆半衰期更长（t1/2 = 90分钟，而匹莫尼达唑在小鼠中为25分钟）。

注射后，Hypoxyprobe?标记物分布到所有组织，但只在那些氧浓度低于14微摩尔的细胞中与含硫蛋白质、肽和氨基酸形成加合物——相当于在37摄氏度下的部分压力pO2 = 10毫米汞柱。正常的组织，如肝脏、肾脏和皮肤，包含在pO2为10毫米汞柱或以下的细胞，这些组织将结合Hypoxyprobe?标记物。收获时组织中未结合的Hypoxyprobe?标记物将在解剖组织缺氧时被激活并结合。然而，与组织在典型实验期间暴露的量相比，残留的Hypoxyprobe?标记物浓度非常小，因此在组织收获时由于残留的Hypoxyprobe?标记物引起的任何非特异性结合都是不可检测的。

图。比较CCI-103F结合（F6，右图）与匹莫尼达唑结合（Pimo，左图）在福尔马林固定的石蜡包埋犬肿瘤活检组织切片中的结合情况。免疫过氧化物酶数据显示，F6结合与匹莫尼达唑的结合非常相似。用于F6和匹莫尼达唑加合物的兔抗血清不发生交叉反应。这允许独立测量两个标记物的结合（参见Kleiter等人，Int. J. Radiation Oncol. Biol. Phys. 64(2): 592-602, 2006）。

福尔马林固定的石蜡包埋组织中CCI-103F结合的免疫过氧化物酶分析的建议方案。

Kleiter等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 64: 592-602, 2006。

Hypoxyprobe?技术是稳健的，鼓励研究者自行进行修改。