Hypoxyprobe-CY 9 Kit流式细胞术检测方案及注意事项说明

Hypoxyprobe-CY 9 Kit是一种专为检测细胞和组织中缺氧状态而设计的免疫化学试剂盒。该试剂盒利用Pimonidazole HCl作为缺氧标记物，通过与缺氧细胞中的巯基化合物形成加合物，再利用CY 9标记的单克隆抗体进行检测，从而实现对缺氧细胞的特异性和高灵敏度标记。

艾美捷Hypoxyprobe-CY 9 Kit（HPB-HP14-1000Kit）主要特性：

1. 高特异性：Hypoxyprobe-CY 9 Kit能够实现对缺氧细胞的特异性标记，确保研究结果的准确性。

2. 高灵敏度：试剂盒中的抗体能够高灵敏度地检测到缺氧细胞中的加合物，即使在低氧水平下也能准确捕捉变化。

3. 多应用性：该试剂盒适用于多种检测方法，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶染色、西方印迹和流式细胞术，为不同实验设计提供了灵活性。

4. 操作简便：试剂盒提供了一套完整的检测方案，简化了实验操作流程。

应用领域：

Hypoxyprobe-CY 9 Kit在多个研究领域具有广泛的应用：

肿瘤学研究：通过检测肿瘤微环境中的缺氧状态，帮助研究者理解肿瘤生长和转移的机制。

神经科学研究：在脑损伤和神经退行性疾病中，检测脑组织的缺氧情况，为疾病机理提供重要信息。

心血管疾病研究：评估心肌缺血等心血管疾病中的缺氧水平，为治疗策略提供依据。

细胞培养研究：在体外细胞培养条件下，研究缺氧对细胞功能和代谢的影响。

使用Hypoxyprobe-CY 9 Kit进行流式细胞术检测的步骤：

准备细胞样本：首先，将目的细胞培养至适当密度，然后根据实验设计，对细胞进行缺氧处理。

给予Pimonidazole HCl：将Pimonidazole HCl以适当的剂量（通常为每公斤体重60毫克）给予实验动物或直接作用于细胞培养。

收获细胞：在给药后的一定时间（通常为15-90分钟）后，收获感兴趣的细胞。

细胞固定和通透化：根据需要，可能要对细胞进行固定和通透化处理，以便于抗体进入细胞内部。

染色：使用CY 9标记的抗Pimonidazole单克隆抗体对细胞进行染色。根据试剂盒说明，可能需要对抗体进行稀释（通常稀释比例为1:50-100）。

流式细胞术检测：将染色后的细胞通过流式细胞仪进行检测。设置适当的电压和滤光片，以检测CY 9的荧光信号。

数据分析：使用流式细胞仪软件对收集到的数据进行分析，确定缺氧细胞的比例和强度。

注意事项：

确保在整个实验过程中避光处理，以防止荧光淬灭。

根据实验的具体需求，可能需要调整抗体的稀释比例，以达到最佳的检测效果。

Hypoxyprobe-CY 9 Kit中的抗体已经与CY 9荧光染料结合，因此不需要额外的二抗。

试剂盒中的Pimonidazole HCl需要在2-8°C下保存，而CY 9标记的抗体则需要在4°C下避光保存，切勿冷冻。