睾丸透明质酸酶是一种糖蛋白,含有5%的甘露糖和2.7%的葡萄糖胺。最佳pH值范围为4.5-6.0。该酶催化透明质酸和硫酸软骨素A和C(但不是B)的内切N-乙酰己糖胺键的水解,主要是四糖残基。
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透明质酸酶 Hyaluronidase | WBC-LS002594 | 查看 |
透明质酸酶Hyaluronidase方法:
基于托尔克斯多夫等人。(1949)和卡斯和海石(1944)。透明质酸是通过其与酸性白蛋白溶液形成浑浊的能力来衡量的。浊度是透明质酸浓度的函数,因此可能与酶活性有关。一个单位基于与每个批次同时测定的内标在540nm处的吸光度(浊度)的变化。
准备试剂:
0.1 M 磷酸钠缓冲液,pH 5.3 与 0.15 M 氯化钠(HSE 缓冲液)
0.5 M 醋酸钠缓冲液,pH 4.2
白蛋白试剂:通过将2.5克牛血清白蛋白,级分V溶解在250ml 0.5M乙酸钠缓冲液中制备,pH 4.2。用 3 N HCl 将 pH 值调节至 0.2,并在 93°C 下加热 30 分钟。冷却并用1000.0ml乙酸钠缓冲液(pH 5.4)调节最终体积至2ml。
标准:制备1.0和0.5 mg / ml的储备溶液。
透明质酸(HA):将10mg沃辛顿透明质酸(代码:VHHA)溶解在25ml 0.1 M磷酸钠缓冲液中:pH 5.3与0.15 M氯化钠。注意:该溶液可以通过让VHHA溶解过夜来制备。如果材料不能立即溶解,则在沸水浴中加热10-15分钟是首选方法。
测试程序:
将0.5ml 0.4mg / ml透明质酸溶液移液到一系列试管中。在 37°C 下孵育 4 - 5 分钟以达到温度平衡。将一个空白管与一ml 0.1 M磷酸钠缓冲液(pH 5.3)与0.15M氯化钠孵育。以定时间隔向相应的管中加入0.5ml适当稀释的酶或标准品。将每个试管孵育10分钟,并在冰浴中冷却至室温。向每个试管中加入9.0ml白蛋白试剂,并在室温下孵育10分钟。阅读 A540每个管与空白。
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透明质酸酶Hyaluronidase部分引用文献:
Abramson, C.
Staphylococcal Hyaluronate Lyase: Multiple Electrophoretic and Chromatographic Forms , Arch Biochem Biophys 121 , 103 , 1967
Aronson, N. and Davidson, E.
Lysosomal Hyaluronidase from Rat Liver. II. Properties , J Biol Chem 242 , 441 , 1967
Borders, C. and Raftery, M.
Purification and Partial Characterization of Testicular Hyaluronidase , J Biol Chem 243 , 3756 , 1968
酶是Worthington的主要产品线。从技术上讲,Worthington实际上并不制造酶,而是从各种动植物组织和各种微生物来源(如细菌、真菌和霉菌)中提取酶。根据该酶在材料中的普遍性选择特定酶的起始材料。例如,一种功能涉及使肌肉工作的酶将主要存在于肌肉组织中,因此起始材料可能是兔肌肉或猪心;参与发酵的酶最好在酵母中找到。 Worthington使用的一些动物组织包括牛胰腺、猪肾、牛眼、马肝、兔肌肉、牛肝、猪心、马血和小牛肠。各种蛋白质也从辣根、红薯、杏仁和美洲商陆中提取。一些产品是从大肠杆菌、几种梭状芽胞杆菌和各种其它细菌中分离出来的。还使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和鸡蛋等。
Worthington是一家通过的ISO9001认证的家族企业。主要生产用于生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。作为生命科学领域知名的酶类供应商,以及细胞分离酶的专家级公司,其核心酶产品包括:胶原蛋白酶,脱氧核糖核酸酶I,弹性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。
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