CellSafe/艾美捷HiSense UDG热不稳定蛋白--低热稳定性和易于失活

HiSense? UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）热敏感型含有在海洋细菌中发现的酶。与大肠杆菌中的UNG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）一样，它水解单链或双链DNA中的尿嘧啶-糖苷键，切除尿嘧啶并在DNA中产生碱基敏感的无碱基位点。这些无碱基位点可以通过内切核酸酶、热处理或碱基处理水解。根据DNA的制备方式，尿嘧啶DNA糖基化酶可以用来实现一般性、位点特异性或链特异性的含尿嘧啶DNA断裂。这种酶显示出较低的热稳定性，因此更容易失活。

尿嘧啶-DNA糖基化酶可以用来在任何含有胸苷残基的位点切割DNA。

由于尿嘧啶-DNA糖基化酶的热敏感性，其主要用途是预防PCR中的交叉污染。与大肠杆菌中的酶相比；使用这种UNG制剂，没有必要在扩增后立即冷冻PCR产物，或者将反应混合物保持在+70°C。

艾美捷CellSafe HiSense UDG热不稳定蛋白#SCU-100组成：

Components                                    Size

Uracil-DNA Glycosylase(UDG) heat labile              100 ?l (1 unit/?l)

储存：

在-20℃下储存检查产品标签上的有效期。

CellSafe HiSense UDG热不稳定蛋白特点：

低热稳定性和易于失活，包括来自海洋细菌的酶。

高效水解单链或双链DNA中的尿嘧啶-糖苷键。

预防PCR中的交叉污染。

测试方案：

1) 向20~50微升的PCR混合液中加入1微升（1单位）UDG。

2) 在25℃下反应5~10分钟。

3) 在95℃下加热2分钟以使UDG失活。

4) 使用经过UDG处理的PCR混合液进行PCR。

CellSafe HiSense UDG热不稳定蛋白结果：

使用PCR产物（包括尿嘧啶碱基）的尿嘧啶DNA糖基化酶的效率

泳道 1: 含有dUTP的1KB PCR产物的108个拷贝

泳道 2: 含有dUTP的1KB PCR产物的107个拷贝

泳道 3: 含有dUTP的1KB PCR产物的106个拷贝

泳道 4: 含有dUTP的1KB PCR产物的105个拷贝

泳道 5: 100bp DNA梯度

泳道 6: 含有dUTP的PCR产物的108个拷贝

泳道 7: 含有dUTP的PCR产物的107个拷贝

泳道 8: 含有dUTP的PCR产物的106个拷贝

泳道 9: 含有dUTP的PCR产物的105个拷贝

使用包括尿嘧啶碱基的连续稀释的PCR产物进行了尿嘧啶DNA糖基化酶的效率测试。同时，HiSense? Taq主混合液也被用作阴性对照进行了测试。反应混合液先在25°C下孵育5分钟，然后95°C下5分钟，接着进行25个循环，每个循环包括95°C下30秒，60°C下30秒，72°C下1分钟。HiSense? Taq主混合液（含UDG）除了dATP、dGTP、dCTP和dTTP外，还含有dUTP。

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