试剂制备丨TSA试剂盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A

酪胺扩增，有时也称为催化报告基因沉积 (CARD)，是一种酶介导的检测方法，它利用辣根过氧化物酶 (HRP) 的催化活性原位产生靶蛋白或核酸序列的高密度标记。据报道，与传统的亲和素-生物素检测相比，酪胺扩增方法的灵敏度提高了 100 倍。可进行多轮酪胺信号放大，进行多重检测。

TSA试剂盒提供了用于小鼠二次检测的所有关键试剂，兔或生物素化的初级抗体，然后在细胞中扩增酪胺信号或组织切片。HRP二级试剂介导标记的酪氨酸酰胺在反应位点附近转化为含有酪氨酸的蛋白质。这允许用大量染料或生物素分子标记的靶蛋白，产生与使用染料标记的第二抗体相比具有更强的荧光信号。

因此，TSA试剂盒提供了高灵敏度和信号背景比的优势，使低丰度靶标的可视化成为可能使用传统的免疫染色方法进行有效标记。

Tyramide扩增可以与染料标记的抗体或其他抗体组合使用用于多色成像的染色方法。两个或多个酪酰胺反应也可以是按顺序执行，以便在一个样品上标记不同的目标。

这些试剂盒可与Biotin XX Tyramide或Biotium的下一代CF?染料一起使用Tyramides与我们的高性能山羊抗小鼠、山羊抗兔，或链亲和素-HRP缀合物。CF?染料提供卓越的亮度和光稳定性与其他荧光染料相比。

艾美捷TSA试剂盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A#BTM-33000组件：

CF? 染料或生物素-酪胺原液

HRP 山羊抗小鼠 IgG(高度交叉吸附)

BSA 用于阻塞

Tyramide Amplification Buffer Plus *

30% 过氧化氢*

TSA试剂盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A特征：

将灵敏度提高多达 100 倍

使用较低的一抗浓度

增强挑战性样品中的信号，例如人类 FFPE 组织

从 6 种明亮且耐光的 CF? 染料或生物素中选择

该试剂盒包含使用山羊抗小鼠 HRP 二抗和荧光 CF? 染料或生物素进行酪胺信号放大 (TSA) 以增加免疫荧光信号的试剂。

试剂制备：

1.如果使用甲醛固定，则在PBS中制备3.75%的甲醛溶液在冰上预冷。如果目标蛋白质或结构能够受到甲醇（如肌动蛋白、核仁素）的干扰。

2.如果使用甲醛固定，则制备渗透缓冲液：0.5%Triton?X-100在PBS中。

3.通过将1g BSA溶解在100mL含有0.5%的PBS中来制备封闭缓冲液Triton?X-100。我们建议立即使用阻塞缓冲区。未使用的阻塞缓冲液可以等分，并在-20°C下储存。

4.将100uL的PBS加入到HRP山羊抗兔IgG、HRP山羊抗体小鼠IgG中，或HRP-链亲和素，并涡旋以溶解所有固体，制成1mg/mL的原液解决方案未使用的储备溶液可以在4°C下储存长达3个月。请勿添加叠氮化钠（NaN3)解决方案。

5.仅适用于链亲和素或生物素XX酪酰胺试剂盒：制备生物素封闭洗涤缓冲液：1%BSA和0.05%TWEEN?20在PBS中的溶液。

6.仅适用于链亲和素或生物素XX酪胺试剂盒：制备未标记的链亲和素溶液：0.1mg/mL链霉亲和素在生物素封闭洗涤缓冲液中（在步骤5中制备）。

7.仅适用于链亲和素或生物素XX酪胺试剂盒：制备生物素溶液：0.5 mg/mL生物素封闭洗涤缓冲液中的生物素（在步骤5中制备）。

Biotium公司是一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司，公司位于美国加利福尼亚的BAY AREA------中外知名首要的生物科技中心。该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生 物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。Biotium公司专利产品众多，包括已经被广泛使用的实时PCR定量荧光染料EvaGreen、具有划时代意义的凝胶核酸染料Gel Red和GelGreen，以及最新推出的Cheetah Taq热启动酶和CF系列蛋白质标记染料等。 n目前，Biotium已将其许多专利技术授权给一些主要的国际生物技术公司，包括安捷伦、BD生物科学、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。