Hypoxyprobe Red 549套件检测说明

Hypoxyprobe?-1 RED 549套件组件的详细描述

1) Hypoxyprobe?-1是一种替代的2-硝基咪唑，其化学名称为皮莫尼达唑盐酸盐，分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔（116毫克/毫升）；在324纳米处有紫外吸收（在0.9%的盐水中消光系数为7020）。其游离碱基，皮莫尼达唑，分子量为254.3，pKa值为8.7，辛醇水分配系数为8.5。固体Hypoxyprobe?-1在室温下在柔和光线中储存两年，并且在4摄氏度的0.9%盐水（100克/升）中储存4.5年，未检测到降解（紫外和HPLC分析）。皮莫尼达唑在缺氧细胞中被还原激活，并与蛋白质、肽和氨基酸中的硫醇（巯基）基团形成稳定的加合物。RED 549染料-MAb1与这些加合物结合，允许通过免疫化学方法进行检测。

2) RED 549染料-MAb1是一种与染料结合的大鼠IgG1单克隆抗体（MAb克隆4.3.11.3），在含有1%牛血清白蛋白和0.09%叠氮化钠的PBS中以0.5毫克/毫升的浓度供应，作为稳定剂。感兴趣的组织可以通过免疫组织化学在冷冻固定切片或福尔马林固定的石蜡包埋切片上进行研究，或者在组织解离后通过流式细胞术进行研究。注意：RED 549染料-MAb1与皮莫尼达唑的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但在免疫组织化学处理过程中，肽和氨基酸加合物会被冲洗掉，因此免疫组织化学的缺氧检测依赖于缺氧组织中皮莫尼达唑的蛋白质加合物。

作为Hypoxyprobe在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐Hypoxyprobe热销产品Hypoxyprobe Red 549套件。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Hypoxyprobe Red 549套件：

应用：用于细胞和组织缺氧的免疫化学检测，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶或流式细胞术。Hypoxyprobe?-1 RED 549试剂盒在福尔马林固定的石蜡包埋的大鼠肿瘤组织中提供强烈的免疫染色和极低的背景。

数量：a. Hypoxyprobe?-1 RED 549试剂盒含有100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（皮莫尼达唑盐酸盐）。通常，动物研究中使用的剂量为每公斤体重60毫克。

b. 一个瓶（100毫克和200毫克试剂盒）或两个瓶（1000毫克试剂盒）含有200微升稀释的RED 549染料结合的IgG1大鼠单克隆抗皮莫尼达唑抗体（克隆4.3.11.3）。每个瓶含有200微升的RED 549染料-MAb1在PBS中的0.50毫克/毫升溶液，含有1%的牛血清白蛋白和0.09%的叠氮化钠。RED 549染料-MAb1的最佳稀释度应由研究者确定，但发现1:50-100的稀释度在大鼠肿瘤组织中能给出强烈的免疫荧光染色。特别为免疫荧光设计的RED 549染料-MAb1可以在荧光显微镜下观察，或在流式细胞术和西方印迹应用中使用。通常免疫荧光的抗体稀释度比免疫过氧化物酶检测系统中使用的要低。

不提供：用于免疫组化分析的标准试剂。

储存：a. 将Hypoxyprobe?-1固体存放在室温下避光处。（也可以存放在2-8摄氏度的黑暗中）。

b. 将RED 549染料-MAb存放在2-8摄氏度的黑暗中。不要冷冻。

检测说明

1. 对正常或肿瘤组织缺氧的调查始于通过静脉输注、腹腔注射或口服给予Hypoxyprobe?-1（皮莫尼达唑盐酸盐）溶液，剂量为每公斤体重60毫克。对于一只25克的大鼠，这相当于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中使用了高达400毫克/公斤的剂量，未检测到毒性或组织缺氧的变化，但60毫克/公斤可以在最低成本下获得良好的免疫染色。Hypoxyprobe?-1在盐水中的溶解度为116毫克/毫升，因此可以使用非常小的体积来施用Hypoxyprobe?-1。注射或摄取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有组织，包括大脑，但它只与那些氧气浓度低于14微摩尔的细胞中的含硫蛋白质形成加合物——相当于在37摄氏度下的部分压力pO2 = 10毫米汞柱。除了肿瘤，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤也拥有pO2 = 10毫米汞柱的细胞或低于此值的细胞。这些正常组织会结合Hypoxyprobe?-1。小鼠体内Hypoxyprobe?-1的血浆半衰期大约为25分钟。相比之下，大鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的大鼠组织可在给予Hypoxyprobe?-1后15至90分钟内采集。在采集时组织中的Hypoxyprobe?-1将在组织解离时被结合，但与组织在15至90分钟实验期间暴露的量相比，残留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于残留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特异性结合是不可检测的。除了动物研究，Hypoxyprobe?套件也可用于组织培养中的细胞（请参阅www.hypoxprobe.com上的应用程序链接）。通常，细胞悬浮液在缺氧条件下与100至200微摩尔的Hypoxyprobe?-1一起孵育1至2小时。通过细胞涂片、固定和用RED 549 MAb-1免疫染色来收集细胞。使用FITC结合的抗皮莫尼达唑大鼠单克隆抗体对福尔马林固定的石蜡包埋组织切片中的皮莫尼达唑加合物进行免疫染色的建议方案。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探针公司）专注于研发非侵略性的缺氧标志物（Hypoxia maker）和缺氧依赖性的细胞因子，所有产品皆基于Pimonidazole核心结构来开发。 使用Pimonidazole HCl作为缺氧标记物，广泛用在狗、大小鼠。缺氧探针试剂盒核心组分为：缺氧探针（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探针的抗体。不同试剂盒中的探针和抗体标记不同（可应用于免疫荧光（IF），免疫组化（IHC），WB或流式细胞分析（FC））

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。