Hypoxyprobe Omni试剂盒的应用及测定说明

Hypoxyprobe?-1 Omni试剂盒组分的详细信息

1) Hypoxyprobe?-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称和唯一成分是pimonidazole盐酸盐。Hypoxyprobe?-1的分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔，相当于116毫克/毫升；在324纳米处有紫外吸收，消光系数为7020，在0.9%的盐水中。其游离碱，pimonidazole，分子量为254.3，pKa值为8.7，辛醇水分配系数为8.5。

Hypoxyprobe?-1在固体形式和水溶液中化学稳定。例如，固体Hypoxyprobe-1在室温下昏暗光线中储存两年，通过紫外和HPLC分析未检测到降解。0.9%盐水中的Hypoxyprobe?-1溶液以100克/升的浓度在4°C下储存4.5年，未检测到降解（紫外和HPLC分析）。

Pimonidazole在缺氧细胞中通过还原激活。激活的中间体与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基（硫醇）基团形成稳定的共价加合物。抗体试剂PAb2627AP与这些加合物结合，允许通过免疫化学方法检测它们。

2) PAb2627AP是一种亲和纯化的兔抗体制剂，与缺氧细胞中Hypoxyprobe?-1的蛋白质加合物结合。PAb2627AP含有叠氮化钠以增加稳定性。感兴趣的组织可以通过冷冻固定或甲醛固定的石蜡包埋切片的免疫组化；西方印迹法；或在组织解离后的流式细胞术进行研究。

注意：PAb2627AP与缺氧细胞中pimonidazole的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但组织处理以准备免疫组化测定时会洗去小分子肽和氨基酸加合物，因此免疫组化缺氧检测依赖于缺氧组织中pimonidazole的蛋白质加合物。

作为Hypoxyprobe在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐Hypoxyprobe热销产品Hypoxyprobe Omni试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Hypoxyprobe Omni试剂盒：

应用：通过免疫荧光或免疫过氧化物酶染色、西方印迹法或流式细胞术进行细胞和组织缺氧的免疫化学检测。当Hypoxyprobe?-1 Omni试剂盒与抗兔二抗试剂（Omni试剂盒中不提供的二抗试剂）结合使用时，在小鼠组织中的背景非常低。

数量：a. Hypoxyprobe?-1 Omni试剂盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?1（pimonidazole HCl）。典型的剂量是小动物研究每公斤体重60毫克，人类研究每公斤体重14毫克。

b. 一盒（100毫克和200毫克试剂盒）或两盒（1000毫克试剂盒）200微升的亲和纯化抗pimonidazole兔抗血清，含有0.09%的叠氮化钠和1%的牛血清白蛋白作为稳定剂。PAb2627AP的最佳稀释度由每位研究者确定，但发现1/50至1/200的稀释度在与过氧化物酶标记的山羊抗兔抗血清结合时，对小鼠肿瘤组织进行免疫染色效果强烈。

不提供：抗兔二抗试剂和标准IHC试剂，如缓冲液、底物色素原等。

储存：a. 将Hypoxyprobe?-1固体存放在室温下的暗处（也可以存放在28摄氏度）。

b. 将兔PAb2627AP存放在2-8摄氏度。不要冷冻。

测定说明

1. 对正常或肿瘤组织缺氧的研究始于静脉输注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe?-1溶液，动物剂量为每公斤体重60毫克，人类为每公斤体重14毫克。对于一只25克的小鼠，这相当于每只小鼠1.5毫克。在小鼠中已使用高达每公斤体重400毫克的剂量，未检测到毒性或组织缺氧的变化，但每公斤体重60毫克可在最低成本下获得良好的免疫染色。Hypoxyprobe?-1在盐水中的溶解度为116毫克/毫升，因此可以使用非常小的体积来施用Hypoxyprobe?-1。

注射或摄取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有组织，包括大脑，但它仅与那些氧气浓度低于14微摩尔的细胞中的含巯基蛋白质形成加合物——相当于在37°C时的氧分压pO2 = 10毫米汞柱。除了肿瘤，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤也拥有pO2为10毫米汞柱或更低的细胞。这些正常组织会结合Hypoxyprobe?-1。

小鼠体内Hypoxyprobe?-1的血浆半衰期大约为25分钟。相比之下，大鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的小鼠组织可在Hypoxyprobe?-1给药后15至90分钟内收获。收获时组织中的Hypoxyprobe?-1将在组织缺氧时结合。然而，与组织在15至90分钟实验过程中暴露的量相比，残留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于残留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特异性结合都是不可检测的。

除了动物研究，Hypoxyprobe?试剂盒还可用于组织培养中的细胞。通常，细胞悬浮液在缺氧条件下与100至200微摩尔的Hypoxyprobe?-1一起孵育1至2小时。通过细胞旋转收获细胞，固定并用PAb2627PA和显色或荧光二抗进行免疫染色。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探针公司）专注于研发非侵略性的缺氧标志物（Hypoxia maker）和缺氧依赖性的细胞因子，所有产品皆基于Pimonidazole核心结构来开发。 使用Pimonidazole HCl作为缺氧标记物，广泛用在狗、大小鼠。缺氧探针试剂盒核心组分为：缺氧探针（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探针的抗体。不同试剂盒中的探针和抗体标记不同（可应用于免疫荧光（IF），免疫组化（IHC），WB或流式细胞分析（FC））

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