Hypoxyprobe Plus试剂盒，用于检测和分析细胞和组织中的缺氧状

Hypoxyprobe?-1 Plus试剂盒组分的详细描述

1) Hypoxyprobe?-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称为pimonidazole盐酸盐，分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔（116毫克/毫升）；在324纳米处有紫外吸收（在0.9%的盐水中消光系数为7020）。其游离碱pimonidazole的分子量为254.3，pKa值为8.7，辛醇水分配系数为8.5。

固体Hypoxyprobe?-1在室温下昏暗光线中储存两年，以及在4°C下0.9%的盐水（100克/升）中储存4.5年，通过紫外和HPLC分析未检测到降解。

Pimonidazole在缺氧细胞中通过还原激活，并与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基（硫醇）基团形成稳定的加合物。FITC-MAb1与这些加合物结合，允许通过免疫化学方法检测它们。

2) FITC-MAb1是一种荧光素结合的抗pimonidazole、大鼠IgG1单克隆抗体（MAb克隆11.23.22.R），在含有0.09% proclin作为稳定剂的PBS中供应，浓度为0.5毫克/毫升。感兴趣的组织可以通过免疫组化在冷冻固定切片或甲醛固定的石蜡包埋切片上进行研究，或在组织解离后的流式细胞术进行研究。

注意：FITC-MAb1与pimonidazole的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但在免疫组化过程中的组织处理会洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫组化缺氧检测依赖于缺氧组织中pimonidazole的蛋白质加合物。

3) 显色抗FITC二抗试剂是为Hypoxyprobe公司准备的亲和纯化的兔IgG多克隆抗染料蛋白结合辣根过氧化物酶。过氧化物酶结合的抗FITC二抗协议提供了强烈的免疫染色，并且与甲醛固定的石蜡包埋的大鼠肿瘤组织中存在的任何自然绿色荧光蛋白的背景信号非常低。

作为Hypoxyprobe在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐Hypoxyprobe热销产品Hypoxyprobe Plus试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Hypoxyprobe Plus试剂盒：

应用：通过免疫荧光、免疫过氧化物酶或流式细胞术进行细胞和组织缺氧的免疫化学检测。当Hypoxyprobe?-1 Plus试剂盒与抗FITC二抗试剂结合使用时，在大鼠组织中自然绿色荧光蛋白（通常会干扰缺氧信号）的背景信号非常低。

数量：a. 3种不同规格的Hypoxyprobe?-1 Plus试剂盒分别包含100毫克、200毫克或1000毫克的pimonidazole HCl。每公斤体重60毫克的剂量足以用于动物研究。

b. 3种不同规格的Hypoxyprobe?-1 Plus试剂盒还包括一盒（100毫克和200毫克试剂盒）或两盒（1000毫克试剂盒），每盒含有200微升的抗pimonidazole、FITC结合的IgG1大鼠单克隆抗体（克隆11.23.22.R）。每个小瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的FITC-MAb1溶液，溶于含有1%牛血清白蛋白和0.09%叠氮化钠的PBS中。FITC-MAb1的最佳稀释度由研究者确定，但发现1:50-100的稀释度在与1:50-100稀释度的过氧化物酶结合抗FITC二抗试剂结合时，在大鼠肿瘤组织中给出强烈的免疫染色。虽然FITC-MAb1并非专为免疫荧光设计，但可以用于此目的。通常免疫荧光的抗体稀释度比免疫过氧化物酶检测要低。

不提供：用于免疫组化分析的标准试剂。

储存：a. 将Hypoxyprobe?-1固体存放在室温下的暗处（也可以存放在2-8摄氏度）。

b. 将FITC-MAb1和HRP结合的兔抗FITC存放在2-8摄氏度的暗处。不要冷冻。

测定说明：

1. 对正常或肿瘤组织缺氧的研究始于静脉输注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe?-1（pimonidazole HCl）溶液，剂量为每公斤体重60毫克。对于一只25克的大鼠，这相当于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中已使用高达每公斤体重400毫克的剂量，未检测到毒性或组织缺氧的变化，但每公斤体重60毫克可在最低成本下获得良好的免疫染色。

Hypoxyprobe?-1在盐水中的溶解度为116毫克/毫升，因此可以使用非常小的体积来施用Hypoxyprobe?-1。注射或摄取后，pimonidazole分布到所有组织，包括大脑，但它仅与那些氧气浓度低于14微摩尔的细胞中的含巯基蛋白质形成加合物——相当于在37°C时的氧分压pO2 = 10毫米汞柱。除了肿瘤，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤也拥有pO2 = 10毫米汞柱或更低的细胞。这些正常组织会结合Hypoxyprobe?-1。

小鼠体内Hypoxyprobe?-1的血浆半衰期大约为25分钟（有关参考文献，请参阅www.hypoxyprobe.com上的FAQ链接）。相比之下，大鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的大鼠组织可在Hypoxyprobe?-1给药后15至90分钟内收获。收获时组织中的Hypoxyprobe?-1将在组织缺氧时结合，但与组织在15至90分钟实验过程中暴露的量相比，残留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于残留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特异性结合都是不可检测的。

除了动物研究，Hypoxyprobe?试剂盒还可用于组织培养中的细胞的Applications链接。通常，细胞悬浮液在缺氧条件下与100至200微摩尔的Hypoxyprobe?-1一起孵育1至2小时。通过细胞旋转收获细胞，固定并用FITC-MAb1和抗FITC显色二抗试剂进行免疫染色。

图.福尔马林固定的吡嘧达唑结合的免疫过氧化物酶染色

使用1:100稀释度的FITCMAb1和1:100稀释的辣根过氧化物酶偶联的兔抗FITC IgG从啮齿动物肿瘤中切下石蜡包埋组织切片。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探针公司）专注于研发非侵略性的缺氧标志物（Hypoxia maker）和缺氧依赖性的细胞因子，所有产品皆基于Pimonidazole核心结构来开发。 使用Pimonidazole HCl作为缺氧标记物，广泛用在狗、大小鼠。缺氧探针试剂盒核心组分为：缺氧探针（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探针的抗体。不同试剂盒中的探针和抗体标记不同（可应用于免疫荧光（IF），免疫组化（IHC），WB或流式细胞分析（FC））

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。