Hypoxyprobe【缺氧探针】太平洋蓝试剂盒检测说明

Hypoxyprobe?-1太平洋蓝试剂盒组件的详细描述

Hypoxyprobe?-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称为匹莫尼达唑盐酸盐，分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔（116毫克/毫升）；在324纳米处的紫外吸收（在0.9%生理盐水中的消光系数为7020）。其游离碱基，匹莫尼达唑，分子量为254.3，pKa值为8.7，辛醇水分配系数为8.5。有关Hypoxyprobe?-1的作用机制、常见问题解答（FAQ）和应用，请访问www.hypoxyprobe.com。固体Hypoxyprobe?-1在室温下避光存放两年，并且在4摄氏度的0.9%生理盐水（100克/升）中存放4.5年，未检测到降解（UV和HPLC分析）。 匹莫尼达唑在缺氧细胞中被还原激活，并与蛋白质、肽和氨基酸中的硫醇（巯基）基团形成稳定的加合物。太平洋蓝染料-MAb1与这些加合物结合，允许通过免疫化学方法检测它们。

太平洋蓝染料-MAb1是一种染料偶联的大鼠IgG1单克隆抗体（MAb克隆4.3.11.3），在含有1%牛血清白蛋白和0.09%叠氮钠的PBS中，以0.5毫克/毫升的浓度供应作为稳定剂。感兴趣的组织可以通过冷冻固定切片或甲醛固定的石蜡包埋切片的免疫组织化学研究，或者在组织解离后的流式细胞术进行研究。 注意：太平洋蓝染料-MAb1与匹莫尼达唑的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但在免疫组织化学处理过程中，肽和氨基酸加合物被冲洗掉，因此免疫组织化学缺氧检测依赖于缺氧组织中匹莫尼达唑的蛋白质加合物。

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【缺氧探针】太平洋蓝试剂盒：

应用：用于检测细胞和组织缺氧的免疫化学方法，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶或流式细胞术。这种Hypoxyprobe?-1太平洋蓝试剂盒在甲醛固定的石蜡包埋的大鼠肿瘤组织中提供了强烈的免疫染色和非常低的背景。

数量：a. Hypoxyprobe?-1太平洋蓝试剂盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（匹莫尼达唑盐酸盐）。通常，动物研究中使用的剂量为每公斤体重60毫克。

b. 一个瓶（100毫克和200毫克试剂盒）或两个瓶（1000毫克试剂盒），含有200微升的稀释的太平洋蓝染料偶联的IgG1大鼠单克隆抗匹莫尼达唑抗体（克隆11.23.22.R）。每个瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的太平洋蓝染料-MAb1溶液，该溶液在含有1%牛血清白蛋白和0.09%叠氮钠的PBS中。太平洋蓝染料-MAb1的最佳稀释度应由研究者确定，但发现1:50-100稀释度在大鼠肿瘤组织中能给出强烈的免疫荧光染色。特别为免疫荧光设计，太平洋蓝染料-MAb1可以在荧光显微镜下或在流式细胞术和Western印迹应用中被可视化。通常免疫荧光的抗体稀释度比免疫过氧化物酶检测系统中使用的要低。

不提供：用于免疫组织化学分析的标准试剂。

储存：a. 将Hypoxyprobe?-1固体存放在室温下避光处。（也可以存放在2-8摄氏度的暗处）。

b. 将太平洋蓝染料-MAb存放在2-8摄氏度的暗处。不要冷冻。

检测说明

对正常或肿瘤组织缺氧的研究始于静脉输注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe?-1（匹莫尼达唑盐酸盐）溶液，剂量为每公斤体重60毫克。对于一只25克的大鼠，这相当于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中使用高达400毫克/公斤的剂量，未观察到毒性或组织缺氧的变化，但60毫克/公斤可以在最低成本下获得良好的免疫染色。 Hypoxyprobe?-1在生理盐水中的溶解度为116毫克/毫升，因此可以使用非常小的体积来施用Hypoxyprobe?-1。注射或摄取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有组织，包括大脑，但它只与那些氧浓度低于14微摩尔的细胞中的含硫蛋白质形成加合物——相当于在37摄氏度下的部分压力pO2 = 10毫米汞柱。除了肿瘤，正常的组织如肝脏、肾脏和皮肤也包含在pO2 = 10毫米汞柱或以下的细胞。这些正常组织结合Hypoxyprobe?-1。小鼠中Hypoxyprobe?-1的血浆半衰期大约为25分钟（有关参考文献，请参阅www.hypoxyprobe.com上的FAQ链接）。相比之下，大鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的大鼠组织可以在施用Hypoxyprobe?-1后60分钟或更长时间收获。在收获时组织中的Hypoxyprobe?-1将在组织缺氧时被结合，但与组织在60分钟或更长时间实验中暴露的量相比，残留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于残留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特异性结合是不可检测的。 除了动物研究，Hypoxyprobe?试剂盒也可用于组织培养中的细胞。通常，细胞悬浮液在缺氧条件下与100到200微摩尔的Hypoxyprobe?-1一起孵化1到2小时。细胞通过细胞旋转收获，固定并用太平洋蓝MAb-1免疫染色。