Hypoxyprobe【缺氧探针】PAb 27试剂盒--优良的荧光性能，低背景干扰

Hypoxyprobe? PAb27试剂盒组件详细信息

Hypoxyprobe?-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称和唯一成分为匹莫尼达唑盐酸盐。Hypoxyprobe?-1的分子量为290.8，水溶性为400毫摩尔，相当于116毫克/毫升；在324纳米处的紫外吸收，0.9%生理盐水中的消光系数为7020。游离碱基匹莫尼达唑的分子量为254.3，pKa值为8.7，辛醇水分配系数为8.5。Hypoxyprobe?-1在固体和水溶液中都具有化学稳定性。例如，固体Hypoxyprobe-1在避光条件下室温存放两年，未检测到降解（通过UV和HPLC分析评估）。在0.9%生理盐水中的Hypoxyprobe?-1溶液以100克/升的浓度在4摄氏度下存放4.5年，未检测到降解（通过UV和HPLC分析）。匹莫尼达唑在缺氧细胞中被还原激活，激活的中间体与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基（硫醇）基团形成稳定的共价加合物。抗体试剂PAb27HAP能够与这些加合物结合，从而通过免疫化学方法进行检测。

PAb27HAP是一种高滴度亲和纯化的兔抗体制剂，能够与缺氧细胞中Hypoxyprobe?-1的蛋白质加合物结合。PAb27HAP中含有叠氮钠以增加稳定性。感兴趣的组织可以通过冷冻固定或甲醛固定的石蜡包埋切片进行免疫组织化学研究；也可以通过Western blotting（蛋白质印迹）或在组织解离后进行流式细胞术进行研究。注意：PAb27HAP能够与缺氧细胞中匹莫尼达唑的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但免疫组织化学检测过程中，组织处理会冲洗掉小分子肽和氨基酸加合物，因此免疫组织化学缺氧检测依赖于缺氧组织中匹莫尼达唑的蛋白质加合物。

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【缺氧探针】PAb 27试剂盒：

应用：用于免疫化学检测细胞和组织的缺氧，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶、Western blotting（蛋白质印迹）或流式细胞术。当Hypoxyprobe? PAb27试剂盒与抗兔二抗试剂（PAb27试剂盒中不提供二抗试剂）结合使用时，在小鼠组织中的背景非常低。

数量：a. Hypoxyprobe?-1 PAb27试剂盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（匹莫尼达唑盐酸盐）。典型的剂量是小动物研究每公斤体重60毫克，人类研究每公斤体重14毫克。

b. 一个瓶（100毫克和200毫克试剂盒）或两个瓶（1000毫克试剂盒），每个瓶含有200微升的高滴度亲和纯化的抗匹莫尼达唑兔抗血清，含有0.09%的叠氮钠和1%的牛血清白蛋白作为稳定剂。PAb27HAP的最佳稀释度需由每位研究者自行确定。

不提供：抗兔二抗试剂和标准的免疫组化（IHC）试剂，如缓冲液、底物显色剂等。

储存：a. 将Hypoxyprobe?-1固体存放在室温下避光处（也可以存放在28摄氏度）。

b. 将兔PAb27HAP存放在2-8摄氏度。不要冷冻。

检测说明

对正常或肿瘤组织缺氧的研究始于静脉输注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe?-1溶液。典型的剂量为小动物研究每公斤体重60毫克，人类研究每公斤体重14毫克。对于一只25克的小鼠，这相当于每只小鼠1.5毫克。在小鼠中使用高达400毫克/公斤的剂量，未观察到毒性或组织缺氧的变化，但60毫克/公斤可以在最低成本下获得良好的免疫染色效果。Hypoxyprobe?-1在生理盐水中的溶解度为116毫克/毫升，因此可以使用非常小的体积来施用Hypoxyprobe?-1。

注射或摄取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有组织，包括大脑，但它只与那些氧浓度低于14微摩尔的细胞中的含硫蛋白质形成加合物——相当于在37摄氏度下的部分压力pO2 = 10毫米汞柱。除了肿瘤，正常的组织如肝脏、肾脏和皮肤也包含在pO2 = 10毫米汞柱或以下的细胞。这些正常组织会结合Hypoxyprobe?-1。

小鼠体内Hypoxyprobe?-1的血浆半衰期大约为25分钟。相比之下，大鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的小鼠组织可在Hypoxyprobe?-1施用后15至90分钟收获。收获时组织中的Hypoxyprobe?-1将在组织缺氧时被结合。然而，与组织在15至90分钟实验中暴露的量相比，残留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于残留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特异性结合是不可检测的。

除了动物研究，Hypoxyprobe?试剂盒也可用于组织培养中的细胞通常，细胞悬浮液在缺氧条件下与100到200微摩尔的Hypoxyprobe?-1一起孵化1到2小时。细胞通过细胞旋转收获，固定并用PAb27HAP及色原性或荧光二抗试剂进行免疫染色。