Hypoxyprobe低氧探针F6试剂盒检测说明

使用Hypoxyprobe?-F6试剂盒通过免疫化学检测（包括免疫过氧化物酶法、免疫荧光法或流式细胞术）测量组织和细胞中的缺氧。（Kleiter等，国际放射肿瘤生物物理杂志64

: 592-602，2006；Ljungkvist等，国际放射肿瘤生物物理杂志62: 1157-1168，2005）

Hypoxyprobe低氧探针F6试剂盒检测说明：

在啮齿动物中，标记物的研究始于将CCI-103F溶解在10% DMSO/90%花生油中的腹腔注射，剂量为60 mg/kg（见Ljungkvist等，国际放射肿瘤生物学物理学杂志62

：1157-1168，2005）。注射后60至120分钟，采集感兴趣的组织。对于CCI-103F，60 mg/kg的剂量在摩尔基础上低于Hypoxyprobe, Inc提供的另一个缺氧标记物pimonidazole HCl，但CCI-103F的血浆半衰期更长（t1/2 = 90分钟，相比之下pimonidazole在小鼠中的半衰期为25分钟）。

注射后，Hypoxyprobe?标记物分布到所有组织，但仅在氧浓度低于14微摩尔（相当于37°C时的分压pO2 = 10 mmHg）的细胞中与含硫蛋白、肽和氨基酸形成加合物。正常组织如肝脏、肾脏和皮肤中的细胞在pO2达到或低于10 mmHg，这些组织会与Hypoxyprobe?标记物结合。在采集时，未结合的Hypoxyprobe?标记物会在组织缺氧时被激活并结合。然而，与典型实验中组织暴露的标记物量相比，残留的Hypoxyprobe?标记物浓度非常小，因此在组织采集时的非特异性结合是不可检测的。除了动物研究，Hypoxyprobe?试剂盒也可用于组织培养中的细胞。

图示：CCI-103F结合（右侧面板F6）与pimonidazole结合（左侧面板Pimo）在福尔马林固定、石蜡包埋的犬肿瘤活检的相邻组织切片中的比较。免疫过氧化物酶数据显示，F6结合与pimonidazole的结合非常相似。F6和pimonidazole加合物的兔抗血清无交叉反应，这允许独立测量这两个标记物的结合（见Kleiter等，国际放射肿瘤生物学物理学杂志64：592-602，2006）。

建议的免疫过氧化物酶分析CCI-103F结合在福尔马林固定的石蜡包埋组织中的协议。Kleiter等，国际放射肿瘤生物学物理学杂志64：592-602，2006。

Hypoxyprobe?技术稳健，鼓励研究者进行自主修改。

艾美捷Hypoxyprobe-低氧探针F6试剂盒：

货号：HP4-XXX

规格：

a. Hypoxyprobe?-F6试剂盒分别含有100、200或1000毫克的CCI-103F（Hypoxyprobe?–F6）。在小动物研究中，典型剂量为每公斤体重60毫克。

b. 每个试剂盒含有稀释的抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6），其中含有0.09%的叠氮钠和1%的牛血清白蛋白作为稳定剂。100和200毫克的试剂盒各含有一个200微升单位的抗血清；1000毫克的试剂盒含有两个200微升单位的抗血清。抗血清的最佳操作稀释度需由研究人员确定，但1/200 - 1/500的稀释度在与过氧化物酶标记的山羊抗兔二级抗体结合时能提供强烈的免疫过氧化物酶染色。

不提供： 抗兔二级试剂或其他免疫组化试剂（缓冲液、抗原修复剂等）。

存储：

a. 将Hypoxyprobe?–F6在暗处于室温下保存（也可存放在2-8摄氏度）。

b. 将兔抗血清（PAbF6）存放在2-8摄氏度。

Hypoxyprobe?-F6试剂盒成分的详细描述：

Hypoxyprobe?-F6（CCI-103F）是一种六氟化的2-硝基咪唑，具有六个磁等效的氟原子，分子量为337.2，水溶解度为5.3毫摩尔，相当于1.8 mg/ml。CCI-103F通常通过10% DMSO/花生油混合物进行腹腔给药（Ljungkvist等，国际放射肿瘤学、生物学与物理学杂志62

: 1157-1168，2005年）。CCI-103F在弱光下储存时非常稳定。CCI-103F在缺氧细胞中被还原激活，激活的中间体与蛋白质、肽和氨基酸中的硫醇（巯基）形成稳定的共价加合物。抗CCI-103F的主要抗血清与这些加合物结合，从而可以通过免疫化学方法进行检测。

抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6）与还原激活的CCI-103F的蛋白质加合物结合，并以稀释的兔抗血清形式提供，含有0.09%的叠氮钠和1%的BSA作为稳定剂。感兴趣的组织可以通过在福尔马林固定的石蜡包埋切片或冷冻固定切片上进行免疫组织化学分析，或通过流式细胞术和组织解离后分析，或通过西方印迹法进行研究。抗CCI-103F抗血清与CCI-103F的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但在为免疫组织化学检测准备的组织处理过程中，肽和氨基酸加合物会被洗去，因此免疫组织化学检测仅依赖于缺氧组织中CCI-103F的蛋白质加合物。对福尔马林固定、石蜡包埋组织切片进行免疫过氧化物酶分析时，将组织切片与约1:500稀释的抗CCI-103F抗血清的100微升孵育。然后施加显色的二抗山羊抗兔二抗，以揭示缺氧标记物加合物的分布。

Hypoxyprobe 致力于为氧代谢紊乱引起的恶性和正常组织疾病提供诊断和治疗工具。

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。