Hypoxyprobe/艾美捷低氧探针Omni试剂盒：用于细胞和组织缺氧检测的高效免疫化学工具

PAb2627AP是一种亲和纯化的兔抗体制备，能够结合缺氧细胞中Hypoxyprobe-1的蛋白加合物。PAb2627AP中含有叠氮化钠以增强稳定性。感兴趣的组织可以通过免疫组化分析冷冻固定或福尔马林固定的石蜡包埋切片进行研究；也可采用Western blot或流式细胞术对组织进行解离后分析。

注意：PAb2627AP结合缺氧细胞中匹莫噻唑的蛋白质、肽和氨基酸加合物，但组织处理会洗去小分子肽和氨基酸加合物，因此免疫组化缺氧检测依赖于缺氧组织中匹莫噻唑的蛋白加合物。

艾美捷Hypoxyprobe-低氧探针Omni试剂盒（HP3-XXX）：

应用：通过免疫荧光或免疫过氧化物酶染色、西方印迹或流式细胞术检测细胞和组织的缺氧。当Hypoxyprobe?-1 Omni试剂盒与抗兔二抗结合使用时，鼠类组织中背景非常低（Omni试剂盒中不提供二抗）。

规格：

a. Hypoxyprobe?-1 Omni试剂盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（氟氧噻唑盐酸盐）。对于小动物研究，典型剂量为60 mg/kg体重；对于人类研究，典型剂量为14 mg/kg体重。

b. 100毫克和200毫克试剂盒各含一个小瓶（200微升），1000毫克试剂盒含两个小瓶，内含亲和纯化的抗氟氧噻唑兔抗血清，含有0.09%的叠氮化钠和1%的BSA作为稳定剂。PAb2627AP的最佳稀释度需由各研究者自行确定，但在与过氧化物酶结合的山羊抗兔抗血清结合使用时，1/50至1/200的稀释度已被发现能在小鼠肿瘤组织中产生强烈的免疫染色效果。

不提供的试剂：

二抗兔抗体和标准的IHC试剂，如缓冲液、底物、显色剂等。

储存：

a. 将Hypoxyprobe?-1固体在室温避光保存（也可存放在28摄氏度）。

b. 将兔PAb2627AP在2-8摄氏度保存。请勿冷冻。

Hypoxyprobe-低氧探针Omni试剂盒检测说明：

对正常或肿瘤组织缺氧的研究开始于以60 mg/kg的剂量通过静脉注射、腹腔注射或口服给药Hypoxyprobe-1溶液，人体剂量为14 mg/kg。对于25克的小鼠，这相当于1.5 mg/mouse。尽管在小鼠中使用高达400 mg/kg的剂量未发现毒性或组织缺氧的变化，但60 mg/kg的剂量在最低成本下能获得良好的免疫染色。Hypoxyprobe-1在生理盐水中的溶解度为116 mg/ml，因此可以使用非常小的体积来给药。

注射或摄入后，Hypoxyprobe-1会分布到所有组织，包括大脑，但只有在氧气浓度低于14微摩尔（相当于37°C下的部分压力pO2 = 10 mm Hg）的细胞中才会与含巯基的蛋白质形成加合物。除了肿瘤外，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤中的某些细胞也处于或低于10 mmHg的pO2。这些正常组织会结合Hypoxyprobe-1。

Hypoxyprobe-1在小鼠体内的血浆半衰期约为25分钟（有关参考，请参见www.hypoxyprobe.com的FAQ链接）。相比之下，老鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。在给药后15至90分钟内，可以收集小鼠的目标组织。此时，组织中的Hypoxyprobe-1在组织缺氧时会保持结合。然而，与在15到90分钟实验期间组织暴露的Hypoxyprobe-1量相比，残留的Hypoxyprobe-1量非常小，因此任何由于残留Hypoxyprobe-1引起的非特异性结合都是不可检测的。

除了动物研究外，Hypoxyprobe试剂盒还可以用于细胞培养（请参见www.hypoxyprobe.com的应用链接）。通常，细胞悬液在100至200微摩尔的Hypoxyprobe-1存在下在缺氧环境中孵育1至2小时。然后，通过细胞离心收集细胞，固定后用PAb2627PA和一种显色或荧光的二抗进行免疫染色。

在冷冻固定组织中免疫染色Hypoxyprobe-1加合物的程序：

大多数已发表的关于荧光免疫组织化学检测皮莫尼达唑加合物的研究都是基于冷冻切片（例如，见Ljungkvist等，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 624: 1157-1168, 2005）。首先收集肿瘤或组织样本，并直接在液氮中冷冻，直到被冷冻切割成4微米的切片。切片然后在-80°C储存，直到进行染色。

切片解冻后，置于冷丙酮（4°C）中固定10分钟。通常，切片会用PBS冲洗并在4°C下与稀释1:20的兔抗皮莫尼达唑抗血清PAb2627AP孵育过夜，抗血清中含有0.1%的牛血清白蛋白和0.1%的Tween 20，但研究人员被鼓励根据特定应用优化稀释度。然后，切片与FITC标记的山羊抗兔抗体或Cy2标记的驴抗兔Fab/2（Jackson Immuno Research Laboratories）一起孵育60分钟。

在整个染色程序的所有步骤之间，切片会用PBS冲洗三次，每次2分钟。

Hypoxyprobe 致力于为氧代谢紊乱引起的恶性和正常组织疾病提供诊断和治疗工具。

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。