FuGENE丨FuGENE HD DNA转染试剂如何使用？

FuGENE HD 是一种100%合成的、多组分的、非脂质体转染试剂，专为将 DNA 传递到更具挑战性的真核细胞和昆虫细胞系而设计。FuGENE HD 与核酸和细胞膜相互作用，以提供高效且安全地进入细胞的方式。这种机制使用户能够克服难以转染的细胞系中的障碍，例如原代细胞、干细胞和悬浮细胞，并且已成功用于转染超过1000种细胞系。凭借直接且快速的方案，FuGENE HD 允许研究人员和科学家释放宝贵的实验室时间。

艾美捷FuGENE HD DNA转染试剂（#HD-1000）用于真核细胞和昆虫细胞的瞬时和稳定转染。将DNA导入真核细胞和昆虫细胞，需要转染试剂具有高效转染和细胞毒性极低的特质。

FuGENE可提供FuGENE 6、FuGENEHD和FuGENE 4K三种DNA转染试剂，以满足研究人员的不同需求。FuGENE DNA转染试剂适用于无论是常规的高性价比转染，还是敏感的，难转染的原代细胞或干细胞。其实验步骤简单、省时，在无血清或含血清培养基中均可转染。可满足科学研究和生产抗体、蛋白质及病毒的需求。

FuGENE HD试剂：DNA复合物的制备和细胞转染

贴壁细胞和35毫米培养皿中的悬浮细胞

对于初步优化，使用FuGENE HD试剂：DNA比例分别为1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1和4:1（微升FuGENE HD试剂对应微克DNA）来准备复合物，下面描述的是为单个六孔板孔或35毫米培养皿准备复合物的方法。这些比例对于常用的贴壁细胞和悬浮细胞通常效果很好。

重要提示：即使在有血清的情况下转染细胞，FuGENE HD试剂：DNA复合物也必须在不含血清的培养基中制备。

比率概述：

制备足以用于35mm培养皿、六孔板中的一孔或二十个96孔板孔的复合体，比率为4：

如何使用FuGENE HD DNA转染试剂？

1.) 在使用前让FuGENE HD转染试剂、DNA和稀释液调整至室温。涡旋混合一秒，或倒置FuGENE HD转染试剂瓶以混合。

2.) 在无血清培养基（无抗生素或杀真菌剂）中稀释DNA：

标记六个小的无菌管：“1.5:1, 2:1, 2.5:1, 3:1, 3.5:1 & 4:1”。向管中加入预热的无血清培养基，以便在步骤3中加入FuGENE HD试剂和步骤2中加入DNA后的最终体积为100微升。

向每个管中加入2微克DNA。涡旋混合一秒或轻弹管子以混合。

3.) 向稀释后的DNA中加入FuGENE HD试剂（无抗生素或杀真菌剂）：

直接将FuGENE HD试剂滴入每个六个管中的培养基里，避免与塑料管壁接触：第一个管中加入3微升，第二个管中加入4微升，第三个管中加入5微升，第四个管中加入6微升，第五个管中加入7微升，最后一个管中加入8微升。现在每个管中的体积应等于100微升。

4.) 混合并孵化复合物：

轻敲管子或涡旋混合一秒以混合内容物。在室温下孵化转染试剂：DNA复合物5-15分钟。

5.) 将复合物加入细胞：

从孵化器中取出培养容器。无需移除生长培养基。以滴加方式将转染试剂：DNA复合物加入细胞。（有关向特定容器大小添加复合物数量的详细信息，请参见表1）。摇动孔板或烧瓶以确保分布到整个板表面。

6.) 将细胞放回孵化器，直到进行基因表达检测。

一旦FuGENE HD试剂：DNA复合物已加入细胞，就无需移除并更换为新鲜培养基（与某些其他转染试剂不同）。根据我们的经验，大多数常见实验室细胞类型（COS-1、CHO-K1、HEK-293、HeLa）在进行基因表达检测（24-72小时后）之前持续暴露于试剂：DNA复合物，不会影响活性。如果您希望在转染过程中（步骤4）使用无血清培养基，则在转染后3-8小时内用含血清的培养基替换。如果您观察到超过10%的细胞死亡，请参考故障排除部分。

艾美捷科技是FuGENE的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。