Glucagon ELISA：定量分析胰高血糖素在血糖调节中的作用

Glucagon ELISA是一种用于定量测定胰高血糖素（Glucagon）的酶联免疫吸附测定技术。胰高血糖素是一种由胰腺产生的多肽激素，具有29个氨基酸，在葡萄糖代谢和维持血糖平衡中起着关键作用。这种ELISA试剂盒能够特异性地检测人、小鼠、大鼠等不同物种的血清、血浆或细胞培养上清液中的胰高血糖素水平。

该试剂盒具有高灵敏度和强特异性，能够与胰高血糖素特异性结合，而与人脑源性神经营养因子（BDNF）、β-神经生长因子（β-NGF）、神经生长因子3（NT-3）、神经生长因子4（NT-4）、睫状神经营养因子（CNTF）等没有交叉反应。此外，与大鼠胰高血糖素有35%的交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%，这表明其具有良好的重复性和可靠性。

本试剂盒仅供专业使用，仅供实验室使用。

艾美捷Glucagon ELISA（ALP-48-GLUHU-E01）组成部分：

1. 抗体包被板

2. 胰高血糖素标准品

3. 标记抗原

4. SA-HRP溶液

5. 底物缓冲液

6. OPD片

7. 终止溶液

8. 缓冲液（A）

9. 缓冲液（B）

10. 浓缩洗涤液

11. 粘附膜

Glucagon ELISA特性：

该试剂盒以敏感的定量能力和高分析特异性为特点。此外，它不受血浆样本中其他组分的影响，且无需样本预处理。本试剂盒中使用的胰高血糖素标准品是一种高纯度的合成产品（纯度高于98%），生物素标记的胰高血糖素经过HPLC纯化。

胰高血糖素ELISA试剂盒分析特异性：

该ELISA试剂盒对胰高血糖素具有高分析特异性，并且对肠道高血糖素、GLP-1和GLP-2没有交叉反应。

Glucagon ELISA检测原理：

本ELISA试剂盒用于测定大鼠、小鼠或人血浆样本中的胰高血糖素，基于一种竞争性酶免疫分析，使用一种高特异性的抗胰高血糖素抗体和生物素-亲和素系统。96孔板用兔抗胰高血糖素抗体包被。将胰高血糖素标准品或样本和生物素标记的胰高血糖素抗原加入孔中进行竞争性免疫反应。孵化和板洗涤后，加入HRP标记的链霉亲和素（SA-HRP），在孔的表面形成HRP标记的链霉亲和素-生物素标记的胰高血糖素-抗体复合物。最后，通过邻苯二胺二盐酸盐（OPD）测定HRP酶活性，并计算大鼠、小鼠或人胰高血糖素的浓度。

材料：

设备需求（不提供）：

1. 能够读取在490纳米处的吸光度2.5的微孔板阅读器。

2. 能够以100转每分钟的速度摇动的微孔板振荡器。

3. 微孔板洗涤装置及带抽吸系统的分配器。

4. 用于8孔或12孔的微量移液管和多通道移液管及其吸头。

5. 用于制备标准溶液的试管。

6. 1000毫升的量筒。

7. 蒸馏水或去离子水。

样本处理：

血浆样本的准备

推荐使用含EDTA-2Na的血液采集管来收集血浆样本，并应立即添加抑肽酶（每1毫升血液添加500kIU）。强烈建议在采集后尽快测试血浆样本。如果需要延后测试，应将样本分装到试管中，并在-30°C或更低温度下冷冻（推荐-70°C以下），在分析前解冻。避免样本反复冻融。

试剂准备：

1. 标准溶液的准备：取标准品（冻干的大鼠/小鼠/人胰高血糖素，每瓶10ng）用1毫升缓冲液（A）进行溶解，得到浓度为10000 pg/mL的标准溶液。取0.5毫升溶解后的标准溶液，并用1.0毫升缓冲液（A）稀释，得到3333 pg/mL的标准溶液。按相同稀释比例依次制备出其他浓度的标准溶液（1111, 370, 123, 和 41 pg/mL）。以缓冲液（A）作为0 pg/mL的对照。

2. 标记抗原溶液的准备：用6毫升缓冲液（B）溶解标记的抗原。

3. 底物溶液的准备：将1片OPD片溶解在12毫升底物缓冲液中。应在使用前立即准备。

4. 洗涤溶液的准备：用蒸馏水或去离子水将50毫升浓缩洗涤溶液稀释至1000毫升。

5. 其他试剂：其他试剂直接使用。