蛋白酶金黄色葡萄球菌V8(内蛋白酶-Glu-C)特异性地切割天冬氨酸或谷氨酸COOH末端的肽键。在铵存在下,酶特异性仅限于谷氨酸位点。它的分子量为27,000道尔顿,最佳pH值为4.0和7.8,以血红蛋白为底物。蛋白酶金黄色葡萄球菌V8被二异丙基氟磷酸盐和一价阴离子如F-,Cl-,CH3COO-和NO3抑制。酶活性由Drapeau描述的酪蛋白消化测定法测定(方法Enzymol.,45,469,1976)。
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蛋白酶,金黄色葡萄球菌(内蛋白酶Glu-C) | WBC-LS003608 | 查看 |
稳定性/存储:自溶发生在高于40°C的温度下。 该酶在USP 0.2%SDS中完全活跃。在12-2°C下可稳定保存8个月。
测定方案:
方法
酶活性由Drapeau(1976)描述的酪蛋白消化测定法确定。由于底物级酪蛋白可能因批次和生产方式而异,酪蛋白消化测定的标准化一直难以实现。建议使用参比酶制剂。一个单位是释放相当于 0.001 A 的酸溶性片段的酶量280在指定条件下,在 37°C 和 pH 7.8 下每分钟。
试剂
1% 酪蛋白在 0.05 M Tris?PO 中4缓冲液,pH 7.8。(将1克“Hammersten”酪蛋白溶解在50毫升0.01N NaOH中,轻轻加热和搅拌。加入40毫升试剂级水和5.0毫升1.0M Tris。用H将pH调节至7.83采购订单4和 q.s. 至 100 毫升。
10%三氯乙酸
酶
以 1 mg/ml 的速度溶解在试剂级水中。
程序
用 5.0 ml 1% 酪蛋白在 37°C 下平衡一系列试管 5 分钟。零时加入 10 ul 或 20 ul 酶。混合。包括试剂空白。加入样品后正好十分钟,通过加入5.0ml TCA停止反应。混合。让试管静置十分钟,然后过滤。阅读 A280的滤液。
计算
单位/毫克 = (一个280测试 - 一个280试剂空白)/反应中10分钟x mg酶
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蛋白酶,金黄色葡萄球菌(内蛋白酶Glu-C)部分引用文献:
Cleveland, D. , Fischer, S. , Kirschner, M. and Laemmli, U.
Peptide Mapping by Limited Proteolysis in Sodium Dodecyl Sulfate and Analysis by Gel Electrophoresis , J Biol Chem 252 , 1102 , 1977
Drapeau, G.
Protease from Staphylococcus aureus , Methods in Enzymology Vol. 45B , L. Lorand , Academic Press, NY , 469 , 1974
Drapeau, G. , Boily, Y. and Houmard, J.
Purification and Properties of an Extracellular Protease of Staphylococcus aureus , J Biol Chem 247 , 6720 , 1972
Drapeau, G.
The Primary Structure of Staphylococcal Protease , Can J Biochem 56 , 534 , 1978
Dugas, H. , Gaudet, F. and Leduc, P.
Structural Studies of Staphylococcal Protease. III. Binding of Anions to the Spin-Labeled Enzyme , Can J Biochem 56 , 7 , 1977
酶是Worthington的主要产品线。从技术上讲,Worthington实际上并不制造酶,而是从各种动植物组织和各种微生物来源(如细菌、真菌和霉菌)中提取酶。根据该酶在材料中的普遍性选择特定酶的起始材料。例如,一种功能涉及使肌肉工作的酶将主要存在于肌肉组织中,因此起始材料可能是兔肌肉或猪心;参与发酵的酶最好在酵母中找到。 Worthington使用的一些动物组织包括牛胰腺、猪肾、牛眼、马肝、兔肌肉、牛肝、猪心、马血和小牛肠。各种蛋白质也从辣根、红薯、杏仁和美洲商陆中提取。一些产品是从大肠杆菌、几种梭状芽胞杆菌和各种其它细菌中分离出来的。还使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和鸡蛋等。
Worthington是一家通过的ISO9001认证的家族企业。主要生产用于生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。作为生命科学领域知名的酶类供应商,以及细胞分离酶的专家级公司,其核心酶产品包括:胶原蛋白酶,脱氧核糖核酸酶I,弹性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。
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