GelRed是一种稳定、安全、灵敏的核酸荧光染料,通过静电及电荷相互作用结合到核酸上,可直接替代剧毒的溴化乙锭(EB),且灵敏度远高于EB,常用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA(双链DNA)、ssDNA(单链DNA)或RNA的染色。GelRed结合单链DNA和RNA荧光信号约是结合双链DNA的一半左右。
经过一系列的测试,GelRed对于手套和细胞膜都是不能穿透的。在浓度远高于凝胶染色工作浓度的情况下,染料也是无细胞毒性和非诱变性的。
GelRed是如何工作的?
与溴化乙锭一样,GelRed 是一种嵌入 DNA 的核酸染料。GelRed 仅通过嵌入结合。
当显示紫外光时,嵌入的 GelRed 会发出荧光,产生明亮的橙色光。 两种产品的光谱几乎相同; 然而,GelRed 被认为是比 EtBr 更安全的替代品,而且更敏感。 GelRed 的另一个好处是它能够与 dsDNA、ssDNA 和 RNA 一起工作,而对于 dsDNA,它的灵敏度是 ssDNA 和 RNA 的两倍。
比较GelRed和溴化乙锭(EB)在1%琼脂糖预制凝胶(TBE缓冲溶液)中的染色效果。使用1kb Plus DNA Ladder样品两倍梯度稀释上样,各泳道上样量从左到右依次为200ng,100ng,50ng和25ng。使用300nm激发的凝胶成像系统和EB滤光片成像并使用Polaroid 667黑白打印
如果 GelRed 是一种嵌入剂,为什么它没有与溴化乙锭相同的风险?
如果它仍然要直接与 DNA 结合,想知道它如何才能真正安全似乎是合乎逻辑的。 虽然 GelRed 和 EtBr 都嵌入 DNA,但 GelRed 的创建使其不会穿透细胞膜。 因为它不能穿透细胞膜,所以 GelRedTM 对活细胞没有毒性。
GelRed:用于聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)的核酸凝胶染色剂
原始的GelRed?染料的安全性部分得益于其较大的分子尺寸,这使得该染料对于细胞膜具有不可渗透性。然而,这种大分子尺寸也会降低GelRed? 染料进入密集的聚丙烯酰胺凝胶的能力。为了解决这个问题,Biotium采用了一种新方法,使得新版本的PAGE GelRed?染料具有细胞膜不可渗透性,而不会使其分子尺寸过大
PAGE GelRed?核酸凝胶染料:
? 一种安全而敏感的聚丙烯酰胺凝胶染料
? 在AMES试验中无毒性和无致突变性
? 水基配方,不渗透乳胶和丁腈手套
? 对水生生物无毒,可由EPA Title 22危险废物测试进行排放处置。
为什么 GelRed 会改变 DNA 的迁移?
GelRedTM 影响 DNA 迁移的原因有很多。 请记住,所有核酸染料都会对 DNA 的移动方式产生一定的影响。 GelRedTM 是一种比 EtBr 重得多的染料,GelRed 对 DNA 的亲和力意味着凝胶中加载的 DNA 越多,GelRedTM 与 DNA 结合并扭曲该片段的运动的次数就越多。
一些防止或最小化 GelRed对迁移影响的建议是: 将其用作后染色剂(我们对此再强调不过分)。 确保您的 GelRed 储备溶液已适当稀释。 您可能还需要减少您使用的 DNA 量,以尽量减少迁移干扰的影响。
GelRed 和 GelGreen 有什么区别?
1.每种产品的荧光。 如您所料,GelRed 会发出类似于溴化乙锭的红色荧光。GelGreen 会发出与 SYBR Green 非常相似的绿色荧光。 任何一种产品都可以与紫外线透射仪一起使用。
2.染色敏感性。 GelRed 是一种比 GelGreen 更敏感的染色剂(灵敏度大约是 GelGreenTM 的五倍),尤其是对于单链核酸。
3.在应用方面,GelRed与聚丙烯酰胺凝胶兼容,但不推荐用于 GelGreen。
4.使用 GelGreen 的一个优点是它与蓝光透射仪的兼容性,如果您想避免紫外线照射,这将很有帮助
Biotium公司是一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司,公司位于美国加利福尼亚的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生 物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。Biotium公司专利产品众多,包括已经被广泛使用的实时PCR定量荧光染料EvaGreen、具有划时代意义的凝胶核酸染料Gel Red和GelGreen,以及最新推出的Cheetah Taq热启动酶和CF系列蛋白质标记染料等。
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