基于脂质体的转染试剂:
脂质体是包裹带负电荷的核酸序列的阳离子脂质。它们被细胞膜吸引并通过内吞作用整合到宿主细胞中。内体酶分解脂质体,DNA片段被释放到细胞质中。这些囊泡是由磷脂人工制造的,主要来自含有带负电荷和中性脂质的混合物,这些脂质能够自动与核酸相互作用,形成进入细胞的稳定结构。该方法对细胞的毒性较小,可以确保大DNA片段整合到宿主细胞中,转染效率高。
已用靶向配体和分子缀合物修饰的聚乙二醇-胆固醇 (PEG-Ch) 缀合物可以提高脂质体转染的效率。Ch2-PEGn可以通过酯化获得,使用溶解的胆固醇和PEG,真空浓缩并在硅胶上纯化。阳离子脂质体可以通过将CHCl32、Ch2-PEGn 和 DOTAP 的混合物溶解在氯仿中并在旋转蒸发器下去除溶剂来获得,这增强了脂质薄膜的形成,可以在真空下进一步干燥,加上添加 5% 葡萄糖溶液和超声处理即可。
艾美捷脂质体转染试剂(ABS-G2500)是一种新型的阳离子脂质体转染试剂,毒性低,转染效率高。且对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率。
脂质体转染试剂应用:
图:DNAfectin'M Plus 试剂能够在存在血清的情况下实现转染。使用DNAfectin'M Plus(产品编号G2500)或竞争对手的转染试剂对HEK-293T细胞进行含有绿色荧光蛋白(GFP)构建物的转染。DNAfectin'M Plus 不需要在转染过程中去除血清/培养基,因为可以直接将转染混合物加入到完全培养基中。
注:DNAfectin'M Plus 是一种转染试剂,用于将核酸(如DNA)有效地引入真核细胞中,常用于分子生物学研究。HEK-293T细胞是一种常用的转染宿主细胞系。GFP构建物是指含有绿色荧光蛋白基因的表达载体,常用于报告基因实验。
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