细胞毒性小或无的FuGENE SI RNA转染试剂，使用指南

FuGENE SI RNA转染试剂利用与 DNA 转染试剂相同的温和可靠性，FuGENE SI，这是一种为 siRNA 传递而设计的创新 RNA 转染试剂。FuGENE SI 是一种 100% 合成的多组分转染试剂，专为将 RNA 分子传递到真核细胞系而设计。

FuGENE SI转染试剂是一种多组分试剂，它能与siRNA、miRNA和其他小RNA形成复合物，然后安全高效地将其运输到真核细胞内。

艾美捷FuGENE SI RNA转染试剂（#SI-1000）的优势包括：

在对细胞温和的同时，提供优质的敲低效率。

在许多常见的细胞类型和难以转染的细胞系中具有高转染效率。

细胞毒性z小或无，允许您使用较少的细胞进行工作，并消除了更换培养基的要求。

需要z小的优化。

灵活且快速的协议。

RNA干扰：

FuGENE SI专为将siRNA、miRNA和其他小RNA输送到常规和难以转染的细胞系而设计。以10nM的siRNA作为起点。

细胞培养条件：

通过使用经常传代、增殖良好（z好处于对数生长期）、并以一致的密度接种的细胞，z小化转染效率的变异性。

其他培养基添加剂：

在某些细胞类型中，通常包含在细胞培养基中的抗菌剂（例如，抗生素和杀真菌剂）可能对FuGENE SI转染试剂的转染效率产生不利影响。如果可能，z初实验时排除这些添加剂。一旦建立了高效率的条件，可以在监测您的转染结果的同时重新添加这些组分。

孵育时间：

将细胞孵育24至72小时。孵育时间的长度取决于siRNA基因靶标、被转染的细胞类型，以及所使用的下游检测方法。在此孵育期后，使用适合您系统的检测方法测量基因或蛋白表达。

附加所需试剂和耗材：

1.) 无菌、无血清的DMEM培养基，无添加剂或补充剂。

2.) siRNA、miRNA或相关的小RNA。

细胞转染前的准备：

选择以下选项之一：

选项 1：快速前向协议：

在转染当天，接种细胞（通常是在传统协议中细胞接种量的2倍，即在转染前一天接种细胞）。直接进行转染。

选项 2：传统前向协议：

在转染实验前一天，用胰蛋白酶处理细胞，调整细胞浓度，并进行接种。将细胞放置在孵化器中过夜。

选项 3：反向（高通量筛选）协议：

按照说明在试剂板中制备FuGENE SI和siRNA复合物，直接将细胞添加到含有复合物的试剂板中（通常是在传统前向协议中细胞接种量的2倍）。

如何使用FuGENE SI RNA转染试剂？

概述的协议将生成足够的主混合液，用于转染单个35毫米培养皿、6孔板的一个孔、24孔板的五个孔，或96孔板的二十五个孔，比例为推荐起始比例（每个96孔板孔0.3微升FuGENE SI + 1皮摩尔siRNA）。对于进一步的扩展和其他容器尺寸，请参见表1。

1.) 使用前让FuGENE SI转染试剂、RNA和培养基调整至室温。旋涡混合一秒，或倒置FuGENE SI转染试剂瓶以混合。

2.) 在两个不同的管中用无血清培养基（无抗生素或杀真菌剂）稀释FuGENE SI试剂和siRNA：

标记两个管：1.) “FuGENE SI” 2.) “siRNA”。

管1：通过将7.5微升FuGENE SI吸入117.5微升培养基中，准备125微升稀释的FuGENE SI。立即轻敲管子或旋涡混合一秒以混合。

管2：通过将2.5微升10微摩尔siRNA吸入122.5微升培养基中，准备125微升200纳摩尔siRNA。轻敲管子或旋涡混合以混合。

3.) 形成FuGENE SI和siRNA复合物：

将125微升稀释的siRNA（管2 “siRNA”）加入到125微升稀释的FuGENE SI（管1 “FuGENE SI”）中，制成250微升的复合溶液。轻敲管子或旋涡混合一秒以混合。

4.) 孵育siRNA-FuGENE SI复合物：

在室温下孵育siRNA-FuGENE SI复合物5分钟（z长可达15分钟）。

5.) 将siRNA-FuGENE SI复合物加入细胞：

从孵化器中取出培养容器。无需移除生长培养基。以滴加方式将siRNA-FuGENE SI复合物加入细胞。摇动孔板或烧瓶以确保分布到整个板表面。

35毫米容器：加入250微升至孔中（每个孔z终使用量：25皮摩尔siRNA + 7.5微升FuGENE SI）

24孔板：每个孔加入50微升（每个孔z终使用量：5皮摩尔siRNA + 1.5微升FuGENE SI）

96孔板：每个孔加入10微升（每个孔z终使用量：1皮摩尔siRNA + 0.3微升FuGENE SI）

关于向其他容器尺寸添加复合物的数量的详细信息，请参见表1。

6.) 孵育细胞24-72小时。然后，通过选择的方法分析转染的细胞。

注意：

与任何实验一样，包括适当的对照。准备未转染的细胞孔、仅含转染试剂的细胞孔，以及适当的阳性和阴性检测对照孔。

siRNA与FuGENE SI的z佳比例，以及添加复合物的z佳总量可能因细胞系、细胞密度、检测日和基因靶标而异。我们建议在96孔板的每个孔中测试0.1-10.0皮摩尔siRNA和0.15-0.6微升FuGENE SI。

表1：制备各种培养容器尺寸的FuGENESI+siRNA复合物的指南表1强调了各种容器尺寸的起始量，使用1pmol siRNA+0.3ul FuGENE SI建议的96孔培养容器单孔起始量。请注意，这只是一个起点，对于特定的细胞系和应用，可能需要优化siRNA+FuGENESI比例和每孔添加的复合物总量。