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细胞毒性小或无的FuGENE SI RNA转染试剂,使用指南

发布者:艾美捷科技    发布时间:2024-07-11     
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FuGENE SI RNA转染试剂利用与 DNA 转染试剂相同的温和可靠性,FuGENE SI,这是一种为 siRNA 传递而设计的创新 RNA 转染试剂。FuGENE SI 是一种 100% 合成的多组分转染试剂,专为将 RNA 分子传递到真核细胞系而设计。

 

FuGENE SI转染试剂是一种多组分试剂,它能与siRNA、miRNA和其他小RNA形成复合物,然后安全高效地将其运输到真核细胞内。

 

艾美捷FuGENE SI RNA转染试剂(#SI-1000)的优势包括:

在对细胞温和的同时,提供优质的敲低效率。

在许多常见的细胞类型和难以转染的细胞系中具有高转染效率。

细胞毒性z小或无,允许您使用较少的细胞进行工作,并消除了更换培养基的要求。

需要z小的优化。

灵活且快速的协议。

RNA干扰:

FuGENE SI专为将siRNA、miRNA和其他小RNA输送到常规和难以转染的细胞系而设计。以10nM的siRNA作为起点。

 

细胞培养条件:

通过使用经常传代、增殖良好(z好处于对数生长期)、并以一致的密度接种的细胞,z小化转染效率的变异性。

 

其他培养基添加剂:

在某些细胞类型中,通常包含在细胞培养基中的抗菌剂(例如,抗生素和杀真菌剂)可能对FuGENE SI转染试剂的转染效率产生不利影响。如果可能,z初实验时排除这些添加剂。一旦建立了高效率的条件,可以在监测您的转染结果的同时重新添加这些组分。

 

孵育时间:

将细胞孵育24至72小时。孵育时间的长度取决于siRNA基因靶标、被转染的细胞类型,以及所使用的下游检测方法。在此孵育期后,使用适合您系统的检测方法测量基因或蛋白表达。

 

附加所需试剂和耗材:

1.) 无菌、无血清的DMEM培养基,无添加剂或补充剂。

2.) siRNA、miRNA或相关的小RNA。

 

细胞转染前的准备:

选择以下选项之一:

选项 1:快速前向协议:

在转染当天,接种细胞(通常是在传统协议中细胞接种量的2倍,即在转染前一天接种细胞)。直接进行转染。

选项 2:传统前向协议:

在转染实验前一天,用胰蛋白酶处理细胞,调整细胞浓度,并进行接种。将细胞放置在孵化器中过夜。

选项 3:反向(高通量筛选)协议:

按照说明在试剂板中制备FuGENE SI和siRNA复合物,直接将细胞添加到含有复合物的试剂板中(通常是在传统前向协议中细胞接种量的2倍)。

 

如何使用FuGENE SI RNA转染试剂?

概述的协议将生成足够的主混合液,用于转染单个35毫米培养皿、6孔板的一个孔、24孔板的五个孔,或96孔板的二十五个孔,比例为推荐起始比例(每个96孔板孔0.3微升FuGENE SI + 1皮摩尔siRNA)。对于进一步的扩展和其他容器尺寸,请参见表1。

1.) 使用前让FuGENE SI转染试剂、RNA和培养基调整至室温。旋涡混合一秒,或倒置FuGENE SI转染试剂瓶以混合。

2.) 在两个不同的管中用无血清培养基(无抗生素或杀真菌剂)稀释FuGENE SI试剂和siRNA:

标记两个管:1.) “FuGENE SI” 2.) “siRNA”。

管1:通过将7.5微升FuGENE SI吸入117.5微升培养基中,准备125微升稀释的FuGENE SI。立即轻敲管子或旋涡混合一秒以混合。

管2:通过将2.5微升10微摩尔siRNA吸入122.5微升培养基中,准备125微升200纳摩尔siRNA。轻敲管子或旋涡混合以混合。

3.) 形成FuGENE SI和siRNA复合物:

将125微升稀释的siRNA(管2 “siRNA”)加入到125微升稀释的FuGENE SI(管1 “FuGENE SI”)中,制成250微升的复合溶液。轻敲管子或旋涡混合一秒以混合。

4.) 孵育siRNA-FuGENE SI复合物:

在室温下孵育siRNA-FuGENE SI复合物5分钟(z长可达15分钟)。

5.) 将siRNA-FuGENE SI复合物加入细胞:

从孵化器中取出培养容器。无需移除生长培养基。以滴加方式将siRNA-FuGENE SI复合物加入细胞。摇动孔板或烧瓶以确保分布到整个板表面。

35毫米容器:加入250微升至孔中(每个孔z终使用量:25皮摩尔siRNA + 7.5微升FuGENE SI)

24孔板:每个孔加入50微升(每个孔z终使用量:5皮摩尔siRNA + 1.5微升FuGENE SI)

96孔板:每个孔加入10微升(每个孔z终使用量:1皮摩尔siRNA + 0.3微升FuGENE SI)

关于向其他容器尺寸添加复合物的数量的详细信息,请参见表1。

6.) 孵育细胞24-72小时。然后,通过选择的方法分析转染的细胞。

注意:

与任何实验一样,包括适当的对照。准备未转染的细胞孔、仅含转染试剂的细胞孔,以及适当的阳性和阴性检测对照孔。

siRNA与FuGENE SI的z佳比例,以及添加复合物的z佳总量可能因细胞系、细胞密度、检测日和基因靶标而异。我们建议在96孔板的每个孔中测试0.1-10.0皮摩尔siRNA和0.15-0.6微升FuGENE SI。


FuGENE SI RNA转染试剂

表1:制备各种培养容器尺寸的FuGENESI+siRNA复合物的指南表1强调了各种容器尺寸的起始量,使用1pmol siRNA+0.3ul FuGENE SI建议的96孔培养容器单孔起始量。请注意,这只是一个起点,对于特定的细胞系和应用,可能需要优化siRNA+FuGENESI比例和每孔添加的复合物总量。


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